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应用糖基化蛋白亲和层析技术对兔肌及人红细胞的3-磷酸甘油醛脱氢酶的分离分析表明,兔肌非糖基化GAPDH的比活为180—200单位,而糖基化gGAPDH的为40—50单位,并占该酶蛋白总量的40%。人类红细胞糖基化gGAPDH的活力占其总活力的55%左右。以上结果表明:哺乳动物体内存在糖基化3-磷酸甘油醛脱氢酶。由于(1)糖基化明显影响GAPDH的活力;(2)糖基化酶活性部位的巯基(Cys-149)空间位置发生了改变;(3)糖基化影响活性部位的空间构象及(4)OPT对糖基化及非糖基化酶的修饰无论在动力学上还是在KI淬灭时都有明显差异,因此,糖基化的位点可能与赖氨酸残基有关,并且接近或位于酶的活性部位。 相似文献
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溴化氰是常用载体(树脂)活化剂,但其毒性很强,具有挥发性,活化后树脂带较强的电荷而导致非特异性吸附.羰基二咪唑(1,1′-carboxyl-diimidazole, CDI)近年来被用于树脂的活化,具有毒性低、相对安全、方便、活化效率高、活化后树脂所带电荷相对较少等优点.由于国内同行很少采用CDI活化树脂制备亲和层析柱或固定化酶,在此介绍该方法的一些关键步骤供同行参考. 相似文献
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应用糖基化蛋白亲和层析技术对兔肌及人红细胞的3-磷酸甘油醛脱氢酶的分离分析表明,兔肌非糖基化GAPDH的比活为180—200单位,而糖基化gGAPDH的为40—50单位,并占该酶蛋白总量的40%。人类红细胞糖基化gGAPDH的活力占其总活力的55%左右。以上结果表明:哺乳动物体内存在糖基化3-磷酸甘油醛脱氢酶。由于(1)糖基化明显影响GAPDH的活力;(2)糖基化酶活性部位的巯基(Cys-149)空间位置发生了改变;(3)糖基化影响活性部位的空间构象及(4)OPT对糖基化及非糖基化酶的修饰无论在动力学上还是在KI淬灭时都有明显差异,因此,糖基化的位点可能与赖氨酸残基有关,并且接近或位于酶的活性部位。 相似文献
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