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体内精原干细胞转染法建立转基因小鼠 总被引:1,自引:0,他引:1
将人Bcl-2 cDNA与小鼠乳清酸蛋白(WAP)5’上游调控序列融合后,与脂质体按一定比例混合,再加入适量的台盼蓝制成转染液,注入到小鼠睾丸中的曲细精管中,转染精原干细胞以探讨建立转基因小鼠的可行性。共注射了3只公鼠,4天后将公鼠与发情母鼠合笼交配,共生仔鼠20只。检测结果表明,有3只呈PCR阳性,Southern blot检测,阳性鼠2只,1只公鼠,1只母鼠,其中,公鼠意外死亡;Western blot证实,1只母鼠的乳腺组织表达了Bcl-2蛋白,其F1代的16只小鼠中,有7只呈PCR阳性。证实了体内精原干细胞转染建立转基因动物的可行性。 相似文献
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为了找到一种新的可用于基因及其表达调控元件鉴定的方法,本试验以蚓激酶(LK)作为目的标志基因,分别构建了在巨细胞病毒(CMV)立即早期启动子、逆转录病毒长末端重复序列(LTR)和beta-酪蛋白启动子调控下的三种真核表达载体pICLK、pLLKSN和pIbLK。制备各重组质粒后,以泌乳期羊乳腺作为支持系统,在处于稳定泌乳阶段分别注射400~800μg重组质粒于山羊乳腺组织中。在注射后不同时间采集奶汁,检测纤溶活性。结果显示,蚓激酶的不同重组质粒在注射到乳腺组织之后迅速得到表达,注射后6~9h蚓激酶表达量达到高峰,并可持续至72h以上;不同表达载体间表达量略有变化,但无显著差异。这些结果表明,利用泌乳乳腺组织表达真核蛋白是鉴定真核基因表达快速有效的手段之一。 相似文献
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PCR扩增近交系大鼠微卫星位点DNA多态性的研究 总被引:1,自引:0,他引:1
李瑞生 陈振文 宋德光 任文陟 栾蓉晖LI Rui-sheng CHEN Zhen-wen SONG De-guang REN Wen-zhi LUAN Rong-hui 《遗传》2001,23(6):539-313
本实验选取大鼠7条染色体上的微卫星位点合成了10对引物,利用聚合酶链反应(PCR)扩增技术对国内北京和哈尔滨等4家单位提供的6个品系(SHR、SHRSP、LEW、RCS、WKY和F344)的8个近交系大鼠群体进行了DNA多态性分析的研究.结果表明:9个微卫星位点具有显著多态性;不同品系个体之间具有多态性;同一群体不同个体之间除SHR(哈)的SMST位点和WKY(哈)的AGT位点出现一定的差异外,其他均没有差异;不同地区同一品系的不同个体之间也存在一定的差异.该方法能有效地对近交系与杂交系、品系与品系、品系与亚系加以区分.因此,本实验为开展近交系大鼠遗传作图、基因定位和为实验动物的遗传背景监测提供可靠的信息,为大鼠遗传基因的研究提供了一个快捷简便、特异准确的方法。
Abstract:In the experiment,It were selected that 20 primers were assigned on 7 chromosomes of inbred rat.DNA polymorphism of 8 colonies from 6 inbred rat strains(SHR、SHRSP、WKY、LEW、RCS、F344)were studied in national Beijing and Harbin using PCR-analyzed microsatellites.The results indicated that there were remarkable polymorphism in 9 microsatellite loci;There is a polymorphism among the various rat strains;and no polymorphism in the same rat strains except SMST locus of SHR(Harbin)and AGT locus of WKY(Harbin)and there is a little difference among the same inbred rat strains in different areas.The method of PCR-analyzed microsatellites can be used for distinguishing between inbred and outbred、different strains、strain and substrain.and it provides a lot of information for genetic mapping,gene location and heredity probe of the inbred rat strains,and a speedy、convenient method for genetic research of the inbred rat. 相似文献
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PCR扩增近交系大鼠微卫星位点DNA多态性的研究 总被引:21,自引:1,他引:20
本实验选取大鼠7条染色体上的微卫星位点合成了10对引物,利用聚合酶链反应(PCR)扩增技术对国内北京和哈尔滨等4家单位提供伯6个品系(SHR、SHRSP、LEW、RCS、WKY和F344)的8个近交系大鼠群体进行了DNA多态性分析的研究。结果表明:9个微卫星位点具有显多态性;不同品系个体之间具有多态性;同一群体不同个体之间除SHR(哈)的SMST位点和WKY(哈)的AGT位点出现一定的差异,其他均没有差异;不同地区同一品系的不同个体之间也存在一定的差异。该方法能有效地对近交系与杂交系、品系与品系、品系与亚系加以区分。因此,本实验为开展近交系大鼠遗传作图、基因定位和为实验动物的遗传背景监测提供可靠的信息,为大鼠遗传基因的研究提供了一个快速简例、特异准确的方法。 相似文献
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重组逆转录病毒介导的转蚓激酶基因兔 总被引:1,自引:0,他引:1
目的通过重组逆转录病毒介导获得转蚓激酶基因家兔。方法将含有蚓激酶基因的表达盒插入到逆转录病毒载体pLNCL中获得了蚓激酶重组逆转录病毒载体,利用脂质体转染PA317包装细胞,G418进行筛选得到了阳性细胞克隆,克隆扩大培养后病毒上清直接注射雄性兔的睾丸组织转染精原干细胞。结果病毒上清经NIH3T3细胞进行滴度测定,最高滴度为1×104CFU/mL。病毒注射3月龄兔睾丸组织,过1.5个月取其睾丸、肾、脾、肝、肺进行组织切片观察,结果正常。提取交配所得F0、F1代仔兔基因组,经PCR、Southern检测,转基因阳性率F0代为6.3%(2/32)、F1代为15.3%(2/13)。结论通过重组逆转录病毒直接注射3月龄兔睾丸组织可获得转基因兔,病毒对兔的脏器无损害。 相似文献
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体内精原干细胞转染法建立转基因小鼠 总被引:6,自引:0,他引:6
将人Bcl-2 cDNA与小鼠乳清酸蛋白(WAP)5’上游调控序列融合后,与脂质体按一定比例混合,再加入适量的台盼蓝制成转染液,注入到小鼠睾丸中的曲细精管中,转染精原干细胞以探讨建立转基因小鼠的可行性。共注射了3只公鼠,4天后将公鼠与发情母鼠合笼交配。共生仔鼠20只。检测结果表明,有3只呈PCR阳性,Southern blot检测,阳性鼠2只,1只公鼠,1只母鼠,其中,公鼠意外死亡;Western blot证实,1只母鼠的乳腺组织表达了Bcl-2蛋白,其F1代的16只小鼠中。有7只呈PCR阳性。证实了体内精原干细胞转染建立转基因动物的可行性。 相似文献
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小鼠体外受精、胚胎培养及胚胎快速冷冻的研究 总被引:5,自引:0,他引:5
目的 为扩大胚胎来源并获取特定胚龄胚胎 ,建立小鼠冷冻胚胎库。方法 运用超数排卵、体外受精与胚胎培养及胚胎冷冻技术系统研究了小鼠受精卵的体内发育与运行规律。卵母细胞的体外成熟与受精、单细胞胚胎培养及胚胎快速冷冻。结果 (1)注射hCG后 12~ 2 0h受精卵发育至原核期 ,4 2~ 4 8h为 2 细胞期 ,4 8~ 6 0h为 4 细胞期 ,6 0~ 6 8h为 8 细胞期 ,以上各期受精卵均处于输卵管中 ;75~ 78h为桑椹胚 ,78~ 80h为致密桑椹胚 ,90~ 92h为早期囊胚 ,92~ 96h为囊胚 ,以上各期均处于子宫角中。 (2 )培养液中添加促性腺激素 (FSH与hCG) ,能显著提高卵母细胞的体外受精率 ,添加FCS和激素组的体外受精率又显著高于单独添加激素组 ,FCS还能显著提高胚胎发育。 (3)在培养液中添加EDTA ,能有效克服小鼠胚胎的 2 细胞阻断 ,其 2 细胞胚的发育率达 10 0 % ,8 细胞胚发育率达 5 5 %以上 ;牛、羊上皮细胞培养液上清也能有效克服 2 细胞阻断。添加乳酸钠和丙酮酸钠可使 2细胞与 8细胞期胚的发育率显著提高。 (4)以D PBS +甘油 +蔗糖为冷冻液 ,以D PBS +蔗糖为稀释液 ,对小鼠胚胎进行快速冷冻 ,桑椹胚的存活率为 6 9 3% ,早期囊胚的存活率为 6 0 4 %。结论 研究为将生物技术应用于小鼠 ,扩大卵子和胚胎来源 相似文献
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建立一种环介导等温扩增(LAMP)检测方法,实现对猫疱疹病毒Ⅰ型(FHV-1)的快速、准确、简便检测。根据Gen Bank中FHV-1的TK基因设计引物,优化反应条件,通过琼脂糖凝胶电泳和SYBR GreenⅠ染色观察分析扩增效果。该方法特异性好,敏感性检测实验表明该检测方法最低能够检测到的模版是101copies/μL,是PCR检测方法灵敏度的10倍。金属浴、烘箱、恒温水浴锅与PCR仪四种不同的扩增反应仪器均可达到LAMP的要求,扩增出梯形条带。建立了针对FHV-1的LAMP检测方法,该种检测方法具有高特异性的扩增引物,对检测的仪器、反应条件及检测人员技术要求比较宽松,从扩增开始到通过SYBR GreenⅠ实现的结果可视化解读所用时间不到1 h,实现了快速、准确、简便检测FHV-1的目的。 相似文献
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