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构建小鼠Smad6基因RNA干扰(RNAi)慢病毒载体,有效沉默骨髓树突状细胞(BMDC)的Smad6基因表达,为构建骨髓致耐受DC用于哮喘等自身免疫疾病的研究。设计小鼠Smad6 shRNA序列,合成、退火,得到双链DNA,与经酶切后的Psih1-H1-copGFP shRNA Vector载体连接产生LV-shSmad6慢病毒载体,并测序鉴定。转染293TN细胞,包装产生慢病毒,测定滴度。感染小鼠骨髓树突细胞,检测Smad6基因的表达状况成功构建Smad6 shRNA的慢病毒载体LV-shSmad6。包装慢病毒,并显著抑制Smad6 mRNA水平及蛋白水平的表达。成功构建出小鼠Smad6基因shR-NA慢病毒载体,为后期研究Smad6基因在哮喘发病机制及新治疗方法提供了稳定的转染细胞载体。 相似文献
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用重组小鼠粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(rmGM-CSF)和重组小鼠白细胞介素4(rmIL-4)体外诱导小鼠骨髓细胞分化为树突状细胞,进行形态学变化观察,分析细胞表面分子,刺激T细胞增殖,探讨小鼠骨髓源树突状细胞(BMDC)体外诱导培养并进行初步鉴定。体外培养9d后BMDC可达80%以上,光镜下可见典型的树突状细胞形态。清楚表达成熟期主要表面标志物,可显著刺激同种异体混合淋巴细胞增殖。获得了较高纯度的BMDC,避免了使用传统磁珠分离方法所带来的成本高,操作复杂,产出率低的弊端,为研究BMDC功能以及运用开展下游实验提供材料。 相似文献
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目的:探讨临床中导致老年人眩晕发作的特点和诊治方法.方法:回顾性分析106例以眩晕发作为主要临床表现的患者的临床资料.结果:老年患者的眩晕发病年龄以60~70岁多见,女性明显多于男性.在106例眩晕患者中,周围性眩晕33例,中枢性眩晕58例,非系统性眩晕15例.引起老年眩晕症的病因以中枢性眩晕为主,心脑血管病是主要病因,其中最常见病因是椎-基底动脉供血不足.结论:老年眩晕是多种因素协同作用的结果,确定病因,全面检查,多科联合诊治十分必要. 相似文献
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该研究探讨全反式维甲酸(all-trans Retinoic Acid, ATRA)对GCs诱导人气道上皮细胞过度凋亡的拮抗作用。将人支气管上皮细胞16HBE作为研究对象,使用10μmol/L地塞米松(Dex)、1μmol/L ATRA处理细胞,体外培养16HBE细胞,分为Dex组、ATRA组、Dex+ATRA组和Control组。采用TUNEL法检测16HBE细胞凋亡情况, Annexin V/PI双染法检测膜磷脂酰丝氨酸外翻的情况,荧光探针JC-1检测线粒体膜电位变化, Western blot检测细胞的凋亡蛋白Caspase-3和其水解片段Cleaved-caspase-3的水平。相较于Control组, Dex组的TUNEL阳性细胞明显增多, Annexin V阳性蛋白明显上调,线粒体膜电位明显下降, Caspase-3和Cleaved-caspase-3的水平明显增高;联合ATRA则可以显著减轻Dex引起的这个趋势。因此, Dex可以导致人支气管上皮16HBE细胞的过度凋亡,而ATRA可以削弱Dex的这种作用。 相似文献
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