浅部真菌病1948份临床标本的真菌学分析

目的 通过对浅部真菌病患者临床送检标本的病原真菌菌种进行系统分析,了解感染及病原真菌的分布情况。方法 采用直接镜检、培养及真菌鉴定等方法对临床送验标本进行检验和鉴定,大部分标本鉴定到种。结果 1948份临床送验标本中,直接涂片镜检阳性率53．41％,培养阳性率40．28％,而镜检＋培养的阳性率为66．98％。对上述3种方法的真菌检出率进行比较,均存在显著差异（χ^2检验P均〈0．005）。在培养的1944份标本中,共分离出18个属,36种真菌,其中,红色毛癣菌24．52％、须癣毛癣菌16．48％、白念珠菌12．64％。结论 ①镜检结合培养的阳性率显著高于单一的镜检或培养的阳性率。②在患者即时的真菌镜检阴性时,应选择培养方法进一步检测,不轻易排除浅部真菌病感染可能。③皮肤癣菌居患者浅部真菌病致病菌首位,而白念珠菌及酵母类菌也是重要病原菌。     

某部官兵野外武装泅渡前后浅部真菌病的调查

目的 了解某部官兵平时和野外武装泅渡时浅部真菌病的发病率及病原真菌分布情况,探讨其发病原因,为采取有效的防治措施提供依据。方法 在野外武装泅渡训练前及野外武装泅渡训练2周后,均对参训官兵进行全面筛查,再取患者浅部真菌感染可能性较大的皮屑,进行真菌学的镜检及培养鉴定。结果 在896名官兵中,平时已有98例存在浅部真菌病,发病率为10．94％。其中足癣56例（57．1％）;股癣30例（36．1％）;体癣12例（12．2％）。武装泅渡时有208例发生浅部真菌病,发病率为23．21％。其中足癣有90例（43．2％）,股癣92例（44．2％）,体癣有26例（12．5％）。致病真菌主要为红色毛癣菌、须癣毛癣菌、白念珠菌等。结论 部队野外武装泅渡时参训官兵浅部真菌病的发病率较平时显著上升,可直接影响部队的训练和战斗力。     

新生隐球菌线粒体的快速抽提和电镜观察

通过NovoZym234酶溶壁和低渗机械振荡破壁相结合,应用差速离心法分离并纯化了对数生长期的新生隐球菌线粒体,然后从经DNaseI处理的线粒体制备液中分离纯化线粒体DNA;并对差速离心中所获得的菌体、原生质体、线粒体三部分沉淀进行了透射电镜观察,结果均证明了我们所抽提的DNA是纯净的,适用于酶切分析和PCR分析研究,由此成功地建立了快速有效分离和纯化线粒体DNA的方法。 Abstract:Cryptococcus neoformans may be grown to the exponential phase,are broken by a combination of NovoZym234 and mechanical means,and mitochondrial DNA was extracted from DNaseI-treated mitrochondrial preparetion by differential centrifugation.Three pellets,including yeast cell,protoplasts,mitochondrial,were examined by transmission electronic microscopy.The resulting mtDNA is sufficicently pure for restriction endonucleases analysis and PCR in further studying.A rapid and effective method for the preparation of the mtDNA of C.neoformans was established.     

CD44在隐球菌性脑膜炎发病机制中的作用研究

目的测定隐球菌性脑膜炎小鼠脑组织中CD44表达,探讨CD44在隐球菌性脑膜炎发病机制中的作用。方法隐球菌性脑膜炎免疫抑制小鼠为实验组,未接种隐球菌的免疫抑制小鼠为对照组,应用免疫组化法检测实验组6h、12h、24h、48h、72h、4d、7d小鼠脑组织CD44表达与对照组的变化。结果对照组小鼠脑组织CD44均匀分布在脑细胞膜上。实验组隐球菌作用小鼠48h、72h后,CD44在小鼠脑组织脑膜侧分布增加,而在脑实质侧CD44的分布明显减少。病灶周围的脑组织CD44分布也一侧增加,另一侧分布减少。结论隐球菌侵入小鼠脑组织后,隐球菌诱导CD44向脑组织的一侧移行,向脑膜方向聚集。病灶周围脑组织CD44分布也不均匀。说明隐球菌性脑膜炎的发生与CD44有密切的关系。     

新生隐球菌的AFLP分析

目的评估AFLP-DNA指纹技术在新生隐球菌分类中应用情况。方法新生隐球菌基因组DNA用双酶酶切,双链接头连于其酶切末端,用与接头和酶切位点互补的引物扩增DNA片段,其产物在高分辨的变性聚丙酰胺凝胶上电泳分离,然后进行银染。结果分析来自5种血清型和临床分离株的18株新生隐球菌,可见有30多条大小在30～500bp的DNA-AFLP指纹,相同的血清型有不同的指纹图谱,来自同一患者不同病期的两株分离株和来自同一患者患者的不同部位的两株分离株都显示出相同的带型。结论显示了AFLP的高分辨率,是适用于新生隐球菌流行病学调查的有力工具。     

白念珠菌菌相转换基因HYR1血清相关启动子活性的研究

目的 探讨血清对白念珠菌菌相转换特异基因HYR1上游启动子活性的影响.方法 在白念珠菌菌相转换基因HYR1上游(-1.8kb～ 43bp)中,取长度不等的片段与LacZ(载体PNG17)报告基因构成重组体,转化酵母菌EGY48,探讨血清对HYR1启动子活性的影响.结果 -600～-400bp区域存在激活启动活性,其他区域未见血清相关的调控元件.结论 在HYR1基因上游-600～-400bp间存在与血清相关的基因调控元件,该区域含有与血清相关的启动转录活性.     

新生隐球菌总RNA抽提方法的实验研究

目的探讨快速获取高质量的新生隐球菌总RNA的实验方法。方法选取新生隐球菌的荚膜株、荚膜缺陷株,分别设计采用4种方法提取总RNA:酸洗玻璃珠法、液氮研磨法、异硫氰酸胍一步法、冷酸洗玻璃珠联合Yeast RNA kit法。用紫外线分光光度计测量其OD260、OD280的值,并且进行琼脂糖凝胶电泳,同时应用定量PCR法鉴定RNA质量。结果酸洗玻璃珠法、液氮研磨法、异硫氰酸胍一步法、冷酸洗玻璃珠联合Yeast RNA kit法的RNA产量分别为0.2μg/105细胞、0.4μg/105细胞、0.1μg/105细胞、0.6μg/105细胞。结论冷酸洗玻璃珠联合Yeast RNA kit法提取的RNA均一性和完整性最好,是简便、快捷地提取具有荚膜和细胞壁双重屏障的新生隐球菌RNA的理想方法。     

联合应用抗真菌药物对不同地区来源红色毛癣菌的体外敏感性实验

目的调查联合应用抗真菌药物对不同地区来源红色毛癣菌的体外抗真菌作用,探讨药物的体外相互作用及地区因素对红色毛癣菌药物敏感性的影响。方法以M38-A方案测定酮康唑、萘替芬、联合使用酮康唑萘替芬以及单用特比萘芬对红色毛癣菌的最小抑菌浓度(MIC),并计算了酮康唑与萘替芬的药物间抑菌浓度指数(FICI)。结果联合使用酮康唑萘替芬组的最小抑菌浓度显著低于单用酮康唑、萘替芬组,和单用特比萘芬组的疗效相似。北京的红色毛癣菌株对上述药物的敏感度均低于上海和南京的菌株。结论联合应用抗真菌药物优于单用,地区差异可能会影响红色毛癣菌对药物的敏感性。     

驻岛部队浅部真菌病及其他皮肤病调查分析

皮肤病是部队作战训练中不可忽视的多发病和常见病,可造成非战斗减员,极大地减弱战斗力。我院调查小组联合第二军医大学附属长征医院皮肤科于2007年6～8月连续对黄海驻岛某部队官兵皮肤病情况进行了追踪调查,现报告如下。1调查方法1.1对象随机抽取不同驻地官兵共4725人,大部分为男性。1.2调查方法调查人员直接深入驻岛部队,在基层部队医务人员的配合协助下,对全体官兵进行皮肤病体检、登记,并详细纪录其发病诱因、发病部位、持续时间、自觉症状、伴发症状、工作环境及个人卫生情况,对可疑浅部真菌病人员,同时刮取鳞屑及甲屑进行真菌直接镜检…     

新生隐球菌基因组DNA不同抽提方法的比较

目的 DNA是进行分子生物学研究的重要基础。在本研究中,我们建立了2种简单快速抽提基因组DNA的方法并可用作PCR扩增的模板。通过比较4种不同的DNA抽提方法以确定哪种更适合进行下一步的基因分析。方法这4种方法是:玻璃珠法,酶法,3%SDS法和氯化苄法。玻璃珠法是用玻璃珠在混漩器上剧烈振荡破碎细胞壁;3%SDS法是将细胞在含10mmol/LDTT的3%SDS溶液中加热,然后用5mmol/LKAc和异丙醇抽提,DNA的产量通过A260测定。结果 3%SDS溶解法、经典酶法、玻璃珠法和氯化苄法的DNA产量分别为0.4154±0.0367、0.8484±0.0756、1.2636±0.2040、0.4070±0.0339(g/L×108CFU/mL)。结论玻璃珠法是最敏感、重复性好、简单、费用合理的抽提方法 。