在肾癌细胞系GRC-1细胞周期不同阶段Wnt-5A基因的表达情况

Wnt基因所编码的蛋白质与许多生长因子一样具有分泌型生长因子的结构特点,其家族成员Wnt-5A是许多恶性肿瘤的自分泌生长因子,在肾细胞癌中表达显著升高.为研究在细胞周期的不同阶段生长因子Wnt-5A在转录水平的表达情况,我们采用胸腺嘧啶双阻断及高压笑气处理的方法,使肾细胞癌细胞系GRC-1细胞同步化.用半定量反转录多聚酶链反应对处于细胞周期不同阶段的细胞cDNA进行扩增,S期与G1,M期Wnt-5A mRNA表达存在差异显著(P＜0.05）.结果提示生长因子Wnt-5A在肾细胞癌的发生中具有潜在的作用,在S期作用可能尤为显著.     

几种信号类物质对蚕豆气孔运动的效应

用表皮生物分析方法,研究H2O2、NO和多胺对蚕豆叶片气孔开放和关闭的单独及其综合效应.其结果表明:H2O2和NO明显促进气孔关闭,抑制气孔开放.腐胺(Put)效应相对较弱,与H2O2和NO未表现出明显叠加效应.     

不同提取方法及上样量对牡丹试管苗茎基部蛋白双向电泳的影响

为建立一套适合于牡丹试管苗茎基部蛋白的双向电泳技术,以便更好地利用蛋白质组技术研究牡丹试管苗不定根的发生机理,本研究比较了三种不同蛋白质提取方法对双向电泳结果的影响,并在蛋白质上样量方面进行了比较。结果表明,乙酸铵/甲醇酚提取法所得2-DE图谱的蛋白点很少,仅检测到45个,且较模糊,有明显的拖尾现象,分辨率很低;乙醇/乙醚丙酮法所得的蛋白点也较少(101个),较模糊,且横竖纹干扰较大;三氯乙酸/丙酮法所得蛋白点数较多,可检测到434个清晰的蛋白点,且形状规则,重复性好,适合后续分析,操作也较为简便。用三氯乙酸/丙酮法提取蛋白,采用800μg、1000μg和1200μg三个不同的上样量进行双向电泳,在上样量为1200μg时(IPGpH3～10,24cm),蛋白质在12%SDS-PAGE胶上得到了较好的分离,在2-DE图谱上可分辨出562个蛋白点。因此,三氯乙酸/丙酮法是较适合于牡丹试管苗茎基部蛋白质提取的方法,1200μg是较为合适的上样量。