Carbohydrates of influenza virus. Structure of the oligosaccharides linked to asparagines 406 and 478 in the hemagglutinin of fowl plague virus,strain dutch

Fowl plague virus, strain Dutch, was metabolically labeled withd-[2-³H]mannose, or withd-[6-³H]glucosamine, and the small subunit (HA₂; 0.8 mg in total) of the viral hemagglutinin was isolated by preparative sodium dodecylsulfate-polyacrylamide gel electrophoresis. After proteolytic digestion, the radioactive oligosaccharides were sequentially liberated from the glycopeptides by treatment with different endo--N-acetylglucosaminidases and with peptide:N-glycosidase or, finally, by hydrazinolysis. In this manner, four groups of glycans could be obtained by consecutive gel filtrations and were subfractionated by HPLC. The structures of the individual oligosaccharides were analyzed by micromethylation, by acetolysis or by digestion with exoglycosidases. The major species amongst the high mannose glycans at Ans-406 of the viral glycopolypeptide were found to be Man1-2Man1-3(Man1-2Man1-6)Man1-6(Man1-2Man1-2Man1-3)Man1-4GlcNac1-4GlcNAc and Man1-3(Man1-2Man1-6)Man1-6(Man1-2Man1-2Man1-3)Man1-4GlcNAc1-4GlcNAc, while the complex glycans at Asn-478 are predominantly GlcNAc1-2Man1-3(GlcNAc1-2Man1-6)Man1-4GlcNAc1-4GlcNAc (lacking, in part, one of the outerN-acetylglucosamine residues) and GlcNAc1-2Man1-3(Gal1-4GlcNAc1-2Man1-6)Man1-4GlcNAc1-4GlcNAc.Abbreviation BSA bovine serum albumin - endo D (F,H) endo--N-acetyl-d-glucosaminidase D (F,H) - HA hemagglutinin (HA₁, large subunit of HA - HA₂ small subunit - FPV fowl plague virus - PNGase F peptide:N-glycosidase F - SDS sodium dodecylsulfate     

On the Phospholipid Metabolism of Glial Cell Primary Cultures.

Abstract: Primary cultures were prepared from newborn rat brain. After 16-18 days, they consisted mainly of mature and immature astrocytes and oligodendrocytes, as judged by immunohistochemistry. To study the metabolism of ethanolamine glycerophospholipids, the cells were incubated with 1-[1-³H]alkyl- sn -glycero-3-phosphoethanolamine (1-alkyl-GPE), for 1–20 h. Five main products were formed: 1-alkyl-2-acyl-GPE; 1-alkyl-2-acyksn-glycero-3-phosphocholine (1-alkyl-2-acyl-GPC); 1-alkenyl-2-acyl-GPE (ethanolamine plasmalogen); 1-alkenyl-2-acyl-GPC (choline plasmalogen); and 1-alkyl-glycerol. Acylation of the substrate was the main reaction during the first 3 h of incubation, whereas desaturation to plasmaiogen reached a maximum after 12 h. Greater amounts of radioactivity were observed in the phosphatidylcholine fraction after longer incubation times. Only small amounts of choline plasmalogen were observed. The phosphatidylethanolamine fraction consisted of 26.5% diacyl-, 27.5% alkyl-acyl-, and 46.0% alkenyl-acyl- compounds, whereas the corresponding data for the phosphatidylcholine fraction were 78.5, 16.4, and 5.1%, respectively, after 20 h of incubation. Hydrolysis of the substrate to 1-alkyl-glycerol was a minor reaction.     

Mechanisms of cell differentiation: Affinity of a morphogenetic factor to DNA

Summary A morphogenetic factor which induces inTriturus gastrula ectoderm tissues which are derived from mesoderm and endoderm has been extracted from chicken and amphibian embryos. The factor which is protein in nature has been obtained from chicken embryos in a highly purified state.The biological activity of the chicken factor is partially inhibited when the factor is combined with chicken DNA or sonicated chicken DNA.When the 3H-labelled factor is combined with sonicated DNA and then centrifuged on a sucrose gradient the factor migrates in part with the DNA. This indicates that the factor is bound to DNA.The inferences from these results are discussed with regard to the possible mechanism of action of the factor and the molecular mechanism of differentiation.     

Die Photosynthese von Meerespflanzen in ihrer Beziehung Zum Salzgehalt

Zusammenfassung Werden Blattstücke vonPosidonia oceanica oder Thallusteile vonUlva lactuca unter sonst optimalen Assimilationsbedingungen aus Meerwasser in Süßwasser, überführt, so sinkt hier die apparente Assimilation beiPosidonia bis zu Null oder gar zu negativen Werten ab, beiUlva bis zu etwa 23% der Leistung im Meerwasser. Bei Rückführung in Meerwasser wird die Assimilationsrate ebenso schnell wieder erhöht, die Ausgangswerte werden allerdings innerhalb der Versuchszeit — einige 20-min-Perioden — meist nicht in voller Höhe wieder erreicht.Folgt der Wechsel zwischen Meer- und Süßwasser im Wechsel von 20 min, so reagieren die Versuchspflanzen mit der gleichen Präzision wie auf das Aus- und Einschalten einer Lichtquelle.Wird anPosidonia die photosynthetische Rate in verschiedenen Stufen verdünnten Meerwassers (Verdünnung nicht mit dest. Wasser, sondern mit Leitungswasser von bekanntem Bicarbonatgehalt und p_H) bestimmt und in Prozenten der Leistung in Meerwasser ausgedrückt, so ergibt sich die in Abb. 3 dargestellte Kurve. Innerhalb der Versuchszeit scheint jeder Meerwasserkonzentration ein bestimmter Photosynthesewert zugeordnet zu sein, ein Verhalten, das auf das Vorhandensein von Gleichgewichtszuständen hindeutet, die zwischen dem photosynthetischen System und dem Zustand des Außenmediums bestehen.Infolge der überaus raschen Reaktion der Pflanzen auf Änderungen im Außenmedium wird als Arbeitshypothese die Vermutung ausgesprochen, daß an der Änderung der photosynthetischen Rate bei Übertragung in und Rückführung aus Süßwasser in Meerwasser nicht Zustandsveränderungen imZellinneren, sondern Zustände der Membranen verantwortlich sind, welche das Ausmaß der CO₂-Permeation bestimmen und damit einen begrenzenden Faktor der Photosynthese darstellen.Mit 4 Textabbildungen     

Das Wachstum infiltrierter Keimlinge

Zusammenfassung Werden Keimlinge vonHelianthus annuus undVicia faba mittels einer Wasserstrahlpumpe mit Wasser infiltriert, so führt dies sofort in allen Organen der Pflanze zu einer sehr starken und mitunter völligen Hemmung des Wachstums. Wirkt der Unterdruck in Luft ein, so daß es hernach zu keiner Wasserfüllung der Interzellularen kommt, so unterbleibt jede Wachstumshemmung.Die Frage nach der Kausalbeziehung zwischen Infiltration und Wachstumshemmung konnte nicht geklärt werden, da die nächstiliegende Annahme, Infiltration führe zu einer Atmungshemmung, durch das Experiment nicht bestätigt werden konnte.Es wird darauf hingewiesen, daß die Zufuhr von Wirk- oder Nährstoffen durch Infiltration eine Methode ist, die in wachsenden Organen nur mit großem Vorbehalt angewendet werden darf, da eine im Wachstum weitgehend gehemmte Pflanze sich in einem anomalen Zustand befindet.Mit 8 Textabbildungen.     

Untersuchungen über das osmotische Verhalten der GrünalgeValonia ventricosa

Zusammenfassung 1.Valonia ventricosa ist eine pantropisch verbreitete marine Grünalge (einziger Fundort im Mittelmeer: Insel Ibiza). Die hier dargestellten Untersuchungen wurden an der Ostküste Venezuelas durchgeführt.2. Die osmotischen Werte (kryoskopisch bestimmt) liegen 1 bis 3 atm über dem Wert des Meerwassers.3. Wachstum und Alter der Zellen ändern den osmotischen Wert nicht.4. Aus Meerwasser in destilliertes Wasser überführt, tritt sehr rasche Abnahme des osmotischen Wertes des Zellsaftes ein (innerhalb von 160 Minuten von 26 auf 2 atm).5. Infolge der größeren relativen Oberfläche nimmt der osmotische Wert kleinerer Zellen viel schneller als der größerer.6. In konzentriertem Meerwasser (31 atm) ändern sich die Zellsaftwerte innerhalb von 3 Stunden nicht.7. In stärker konzentriertem Meerwasser sterben die Zellen rasch ab. Ihr Zellsaft wird damit zum Spielball der Außenbedingungen.8.Valonia ventricosa ist somit ein stenohaliner Organismus ohne erkennbare Fähigkeit zur Osmoregulation.9. Zugabe von CaCl₂ zum destillierten Wasser verlangsamt zunächst die Abnahme des osmotischen Wertes.10. Die chemische Untersuchung des Zellsaftes zeigt auch bei dieser Art das Vorherrschen des Kaliums, das gegenüber dem Meerwasser 66fach konzentriert ist.11. Die Zellwand färbt sich mit Methylenblau stark an, ist jedoch für diesen Farbstoff in keiner Richtung permeable. Angefärbte Zellwände scheinen eine geringe Ionenpermeabilität zu besitzen.12. Elektronenoptische Untersuchnugen der Zellwände zeigen, daß diese aus 40 bis 50 Lamellen bestehen, wobei benachbarte Lamellen eine überkreuzte Paralleltextur (Fischgrätenmuster) besitzen. Da die Zellen — im Gegensatz zu anderenValonia-Arten — nicht in destilliertem Wasser platzen, muß die Zellwand entweder hohe Drucke auszuhalten vermögen oder eine relativ geringe Wasserpermeabilität besitzen.

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Investigations on the osmotic behaviour of the green algaValonia ventricosa

Among the marine Chlorophyta,Valonia ventricosa represents a pantropic species; one of its few extratropical localities is the island Ibiza in the Mediterranean. Our physiological investigations were carried out during several months between 1960 and 1963 in the coastal waters of Venezuela (Mochima Bay near Cumana). The following results were obtained: 1. The osmotic values (measured with the kryoskopic method) are 1 to 3 atm higher than those of the seawater (salinity 36–37 ). 2. Neither size nor age of the cells influence the osmotic characteristics of the cell sap. 3. A transfer from marine to distilled water causes a rapid decrease of the osmotic values (within 160 minutes from 26 to 2 atm). Due to the bigger relative surface, this decrease is more rapid in small cells than in the bigger ones. 4. In concentrated seawater with 31 atm the osmotic values of the cells did not change within 3 hours. 5. In more concentrated or in diluted seawater, the cells are irreversibly damaged within a short time.Valonia ventricosa can therefore be considered as a stenohaline aliga without any recognizable osmoregulation. 6. Addition of CaCl₂ delays the decrease of the osmotic value. 7. Chemical analysis of the cell sap demonstrates the well-known prevalence of potassium, which is 66 times more concentrated than in seawater. 8. The cell wall can be easily stained with methyleneblue and in this case the permeability for anorganic ions is probably reduced. 9. Photographs taken with the electron-microscope show in cross section the multilammellate nature of the cell wall and the change of the fibrillar-direction from one lamella to the other, giving the picture of a cross-fibrillar structure. Since the cells — in contradiction to those of otherValonia species — do not burst in distilled water, it must be assumed that the cell wall structure is able to resist high pressures (about 26 atm) or is characterized by a relatively low water-permeability.

     

Use of Solid-Phase Extraction To Determine Ergosterol Concentrations in Plant Tissue Colonized by Fungi

At present, the ergosterol and acetate-to-ergosterol techniques are generally considered to be the methods of choice to quantify fungal biomass, growth rate, and productivity under natural conditions. Both methods rely on the accurate isolation and quantification of ergosterol, a major membrane component of eumycotic fungi. Taking advantage of the solid-phase extraction (SPE) technique, we present a novel method to determine the ergosterol concentration in lipid extracts derived from plant tissues and dead organic matter colonized by fungi. In this method, a primary alkaline extract is acidified and passed through a reversed-phase (C(inf18)) SPE column. The column is then washed with an alkaline methanol-water solution to eliminate interfering substances and increase pH and is thoroughly dried in air. Ergosterol is eluted with alkaline isopropanol. This eluting solvent was chosen to produce a strongly basic pH of the final extract and thus confer stability on the ergosterol molecule before high-performance liquid chromatography analysis. The recovery of ergosterol from plant tissues and the O(infhf) horizon of a woodland soil ranged from 85 to 98%, and the overall extraction efficiency was similar to that obtained by a conventional procedure involving liquid-liquid extraction. Potential pitfalls of ergosterol analysis by SPE include (i) insufficient acidification before sample loading on the extraction column, resulting in a poor affinity of ergosterol for the sorbent; (ii) incomplete drying of the sorbent bed before the elution step; and (iii) chemical breakdown of ergosterol after elution, which was found to be related to a low pH of the final extract and a high concentration of matrix compounds. When these pitfalls are avoided, SPE is an attractive alternative to existing methods of ergosterol analysis of environmental samples.     

Enzymatic properties of human glucuronyltransferase and a sensitive method for its assay in a stable B lymphocyte cell line

Properties of lymphocyte glucuronyltransferase were studied in homogenates of SN1006 cells. A sensitive assay procedure for lymphocyte glucuronyltransferase was developed utilizing radioactive testosterone as the acceptor substrate and TLC for separation of the metabolite. The method is capable of detecting picomolar quantities of the product. The enzyme activity exhibited a broad pH optimum, and was subject to activation by the detergent Lubrol WX and Mn++ ions. The activity conformed to the Michaelis-Menten kinetics giving apparent Km values of 0.8 mM and 11 microM, for UDPGA and testosterone, respectively. 4-Methylumbelliferone, a-naphthol and p-nitrophenol behaved as competitive inhibitors of testosterone glucuronidation. The results indicate that the method could be used for genetic studies of human lymphocyte glucuronyltransferase, and that the enzyme is of consequence in detoxication of exogenous as well as endogenous substrates.