简便、快速提取高质量的RNA分子

MethodsforHandy,RapidIsolationofHighQualityRNAbyGuanadiumThioeyauateDuJianYuanYanhuaMaShenglinDongZhiwei(BeijingInstituteforCancerResearchBeijing100034)硫氰胍是一种有效的蛋白变性剂。早在1979年,Chirgwin等就利用氯化铯／硫氰胍超离心技术成功地从RNA酶富集的胰脏组织中提取出未降解的RNA分子[2],从而使它成为抑制RNA酶的首选药物并得到广泛使用,但受到超速离心设备的限制。1983年,Cathala报道了氯化锂／硫氰胍RNA提取法[1]。该方法操作简便,获得的RNA质量很高,但所需时间较长。为了能在短时间内更快…     

Coordinated mRNA and Protein Expression of Human LAMP-1 in Induction of Melanogenesis After UV-B Exposure and Co-Transfection of Human Tyrosinase and TRP-1 cDNAs

In order to better understand the cascade of melanogenic events in melanocytes, this report has introduced our two recent approaches for the expression of melanogenesis/or melanosome-associated genes and encoded proteins in melanocytes (melanoma cells) after repeated exposure to UV -B and after cotransfection of two human genes, i.e., tyrosinase and tyrosinase-related protein-1 (TRP-1). Repeated exposure of UV B (2.5–5.0 mJ/cm²) caused not only upregulation of tyrosinase and TRP-1 genes but also coordinated increase in the gene and protein synthesis expression of Lamp-1 (lysosome-associated membrane protein-1). When COS-7 kidney cells and amelanotic melanoma (C32 and SKMEL-24) and melanotic melanoma (G361 and SK-MEL-23) cells were exposed to cotransfection of human tyrosinase and TRP-1 cDNAs, there was also an increased expression of Lamp-1 mRNA and protein along with tyrosinase activation and new melanin synthesis. Importantly, single transfectants of human tyrosinase cDNA revealed marked cellular degeneration, whereas this degeneration was not seen in single transfectants of TRP-1 cDNA or cotransfectants of human tyrosinase and TRP-1 cDNAs, indicating that TRP-1 prevented, along with Lamp-1, programmed death of melanocytes after transfection of tyrosinase gene. The coordinated expression of TRP-1 and Lamp-1 was further confirmed by antisense oligodeoxynucleotide hybridization experiment against Lamp-1 gene, showing the decreased expression of TRP-1 as identified by three different types of anti-TRP-1 monoclonal antibodies. We propose therefore that human tyrosinase and TRP-l, when activated or expressed together, will coordinate to upregulate the mRNA expression and protein synthesis of Lamp-1. The Lamp-1 molecules will, in turn, cover the inner surface of melanosomal membrane, together with TRP-1 molecules, thus protecting the melanosomal membrane from toxic melanin intermediates generated during melanogenesis in the presence of active tyrosinase. In contrast, the expression of other lysosome-related proteins, e.g., β-galactosidase and CD63 is not stimulated in new melanogenesis.     

钾通道阻断剂所致的蜗内直流电位改变

本实验采用耳蜗外淋巴灌流技术,观察了四氨基吡啶(4-AP)、四乙基铵(TEA)以及奎宁等不同钾通道阻断剂对豚鼠蜗内直流电位(EP)的影响。发现快钾通道阻断剂4-AP对EP无明显影响,但可改变强噪声所致EP改变的形式。TEA与奎宁则可减少负相EP(N-EP)的绝对值。实验结果提示耳蜗内有不同类型的钾离子通道存在并各具有不同的生理意义。     

家兔三叉神经终止核对颏舌肌肌电活动的调制作用

本工作在35只氨基甲酸乙酯麻醉、自主呼吸的家兔上观察了刺激三叉神经终止核(NTV)对颏舌肌肌电活动的影响。结果发现,电刺激NTV和NTV内微量注射谷氨酸钠都能使颏舌肌出现明显的易化效应。电刺激NTV背侧与腹侧时,颏舌肌肌电反应的潜伏期分别为5.9±0.7ms和3.0±0.4ms,电刺激舌下神经核时颏舌肌反应的潜伏期为2.2±0.2ms。结果提示三叉神经终止核的兴奋可加强颏舌肌的活动从而减小上呼吸道阻力。     

单增李斯特菌胎盘感染的体内外模型研究进展

单核细胞增生李斯特氏菌（Listeria monocytogenes）是重要的食源性致病菌,能引发人类的李斯特菌病,是全球公共卫生问题之一。该菌易感染孕妇,引起胎儿和新生儿的侵袭性李斯特菌病,严重威胁母婴健康。因此,建立有效的单增李斯特菌感染胎盘体内外模型,解析和探究单增李斯特菌经胎盘感染机制,是预防和控制单增李斯特菌感染母婴的关键所在。本文综述了可用于研究单增李斯特菌母婴感染的体内外胎盘模型,总结和讨论了各类模型的优势和局限性;并着重分析了体外三维胎盘屏障模型在单增李斯特菌感染方面的研究进展和未来研究方向。以期为深入解析该菌经胎盘感染的途径、发病机制提供支持,并为预防和控制母婴李斯特菌病提供科学参考。     

大肠杆菌rpoH基因的克隆,表达及其产物的纯化

本文用ＰＣＲ方法获得大肠杆菌热休克蛋白转录因子σ３２的编码基因ｒｐｏＨ,并克隆在含有ｔａｃ启动子的表达载体ｐＵＨＥ中,经ＩＰＴＧ诱导,在大肠杆菌中表达了Ｃ端融合有６个寡聚组氨酸的σ３２。表达产物经金属螯合层析一步纯化,达到ＳＤＳ－ＰＡＧＥ银染一条带纯度,氨基酸组成分析及Ｎ端序列分析结果与文献报道一致。３５Ｓ细胞内参入实验表明：即使在较低的温度下,表达产物σ３２（Ｈｉｓ）６也能导致热休克蛋白如ＧｒｏＥｌ、ＤｎａＫ、Ｈｔｐ的大量合成．     

鄂尔多斯市生态资产和生态系统生产总值评估

鄂尔多斯市属于生态环境脆弱区域,在大规模开发丰富能源资源的同时,生态环境保护也在不断加强,评估鄂尔多斯生态资产价值,是认识鄂尔多斯生态价值的关键。构建了生态资产、生态系统生产总值评估的理论框架和评估方法指标体系,基于鄂尔多斯市生态系统格局、质量数据,评估了鄂尔多斯市生态资产、生态系统生产总值。评估结果表明:(1)2015年,鄂尔多斯市生态系统质量等级以差、低、中为主,分别占比:50.74%、31.78%、6.17%,差、低、中等级的生态系统面积之和占比88.69%。(2)2015年,鄂尔多斯市生态资产指数为1998.19,其中生态资产指数最高的是鄂托克旗,生态资产指数为392.26,占比19.63%,其次是杭锦旗,生态资产指数为307.48,占比15.39%。2010—2015年,鄂尔多斯市生态资产指数总体呈上升趋势。其中,上升最为剧烈的区域是鄂托克前旗,生态资产指数上升92.72,占比19.38%,其次为乌审旗,生态资产指数上升91.04,占比19.03%。(3)2015年,鄂尔多斯市生态系统生产总值(GEP)为2481.71亿元,GEP约为2015年GDP总值的58.72%,鄂尔多斯市单位面积GEP为0.03亿元/km~2,人均GEP为12.14万元/人。2010—2015年,鄂尔多斯市生态系统生产总值从1975.50亿元增加至2481.71亿元,增加量占2010年GEP价值的比例为25.62%,上升趋势明显。(4)2010—2015年,鄂尔多斯市生态系统质量变化原因主要是GDP增长(P0.05),表明经济持续发展降低了当地人口对草地、森林的经济的依赖性。鄂尔多斯市生态资产指数上升的主要驱动因素气候因素降水的增加(P0.001)、人口密度的下降(P0.01),以及GDP的增加(P0.01)。鄂尔多斯间生态系统生产总值变化的主要驱动因素,包括城市扩张、农田开垦、退耕还林、草、湿、生态恢复、矿山开采、生态退化等。本研究根据鄂尔多斯市生态系统质量、生态资产、生态系统生产总值面临的问题,提出了生态保护建议与对策。     

斜卧青霉Ju-A10产CMCase培养条件的优化

通过响应面分析法对Ju-A10利用不同植物纤维废弃物为碳源生产CMCase条件进行优化 ,结果显示碳源分别为玉米秸粉和高粱秸粉,碳源水平分别在8.00%、10.05%,300 mL三角瓶装液量分别为55.25 mL、49.65 mL时, CMCase为最高,分别为29.43 IU/mL、37.57IU/mL .R2分别达到了0.9099、0.8592,说明发酵预测模型可靠性较高,可应用于培养条件的优化.