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LipofectAMINE2000与Fugene6转染细胞的效率比较 总被引：1，自引：0，他引：1
目的:比较LipofectAMINE2000与Fugene6转染细胞的效果。方法:将含有Firefly和Renilla荧光素酶基因的质粒分别用LipofectAMINE2000和Fugene6转染293T、HepG2和DLD-1细胞,于48h后裂解细胞测定荧光素酶活性。结果:在293T细胞中,LipofectAMINE2000转染组的萤火虫(Firefly)和Renilla荧光素酶活性分别是Fugene6转染组的6.5和5.6倍(P<0.005);在HepG2细胞中,LipofectAMINE2000转染组的Firefly和Renilla荧光素酶活性分别是Fugene6转染组的44和49倍(P<0.001);而在DLD-1细胞中,两者无差别。结论:转染试剂LipofectAMINE2000和Fugene6对不同细胞的转染效果存在差异,当进行转染实验时,对于不同的细胞须根据情况进行选择。 相似文献
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CYP3A4基因原核表达质粒构建与诱导表达 总被引：1，自引：0，他引：1
以质粒pCWNF14为模板,采用PCR技术扩增出CYP3A4基因,并将其接入pET-22b（＋）、pET-28b（＋）和pET-32a（＋）载体中,经PCR测序鉴定后,转化Rosetta（DE3）2pLysS细菌,并用IPTG诱导表达．采用考马斯亮蓝染色的方法检测重组蛋白表达,3个表达重组质粒中,只有pET-32a（＋）-CYP3A4可以表达目的蛋白;在低浓度IPTG（50μmol／L）诱导6h,所表达的CYP3A4蛋白约占细菌总蛋白的40％。且该蛋白不溶于8mol／L的尿素,而溶于去污剂10mmol／L 3-（（3-Cholamidopropyl）dimethvlammonio propanesulfonic acid（CHAPS））和0．3％ lauroyl sarcosine（SKL）．成功地使CYP3A4基因在原核系统中高效表达． 相似文献
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