HBcAg表达菌株的筛选、初步鉴定与DNA顺序分析

为提高HBcAg(乙型肝炎核心抗原)在大肠杆菌体内表达水平,将有HBcAg的基因片段用核酸外切酶从两端消化,插入载体质粒pUR222的EcoRI酶切位点,转化Ecoli BMH71—18,用菌落原位酶联免疫法由275个转化子筛选到7株阳性克隆,用ELISA比较了它们的表达水平,表达水平最高者为M2066菌株,P/N=2.0时菌体裂解液的稀泽度为1:33000’比表达最低者M2098高8,000倍,比第一代菌株M206高15,000倍,DNA顺序分析结果表明与mRNA起始密码上游的发卡结构去除有关。用SDS-PAGE和聚乙烯簿膜复印法检测菌体裂解液中HBcAg的分子量为21000,42000及63000,呈单体和聚合物形式存在,比由病人肝脏和血液中提取的HBcAg(19000)分子量大,为融合蛋白。经琼脂免疫双扩散与ELISA阻断试验未发现与β半乳糖苷酶有免疫学交叉反应。用ELIDA法,M2066-HBcAg与肝-HBcAg同时检测40份血清标本的抗-HBc,二者符合率95％。