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人毒素源性大肠杆菌热敏感肠毒素基因的克隆和表达 总被引:1,自引:1,他引:0
用限制酶Pst I完全消化毒素源性大肠杆菌H10407的热敏感肠毒素(LT)质粒DNA,酶切片段经电泳分离后,用southern分子杂交技术定位LT基因。回收5.3kb的LT DNA片段并将它与Pst I完全酶解的pUC8DNA混合,体外连接后用于转化感受态E.Coil JM83细胞。筛选后获得了一株能有效表达LT的重组子。免疫学及生物学测定表明,此克隆株所产生的LT与亲本株H10407所产生者具有相同的免疫原性和生物活性,且其产最为亲本株的16倍。 相似文献
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表达毒素源性大肠杆菌定居因子抗原CS6的一组基因的克隆 总被引:9,自引:0,他引:9
人源毒素源性大肠杆菌(Enterotoxigenic E.Coil ETEC)是引起婴幼儿及旅游者腹泻的主要致病菌。ETEC的致病因子包括定居因子抗原 (Colonization factor antigens,CFAs)和肠毒素。大多数ETEC菌株均能产生抗原特异的菌毛,介导细菌与宿主小肠粘膜表面并在粘膜表面上受体的结合,使得细菌能定殖于粘膜表面并在粘膜的功能性清除中存活下来。已经报道的定居因子抗原包括CFA/Ⅰ,CFA/Ⅱ、CFA/Ⅲ、CFA/Ⅳ(PCF8775)、PCF09和PCFO159等。CFA/Ⅰ和CFA/Ⅲ均由单一的菌毛亚基构成,CFA/Ⅱ、CFA/Ⅳ则由多种表面抗原(colisurface antigen,CS)复合而成。所有的CFA/Ⅳ阳性菌株均表达CS6抗原,其中有些同时表达CS4或CS5抗原。CS4和CS5都是直径6~7nm的菌毛,能引起人和牛血红细胞的甘露糖抗性的凝集反应(MRHA)。迄今为止,没有观祭到CS6明显的菌毛结构,CS6也不能引起MRHA阳性反应。然而动物实验的结果表明,CS6是CFA/Ⅳ复合抗原中一种对定居作用最重要的抗原”,。本研究组已经通过分子克隆的手段获得了能分别表达CFA/Ⅰ和CS3抗原的重组菌株,用于人源ETEC疫苗的研究。本文报道了表达CS6菌毛抗原的DNA片段的克隆,并用免疫吸附制备的CS6抗血清测定了重组菌株表达的菌毛蛋白。 相似文献
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本文介绍了被动免疫溶血试验检测埃希氏大肠杆菌不耐热肠毒素的方法;比较了四种不同培养基以及抗CT血清和抗LT血清对测定结果的影响。经对236株人源和24株猪源毒素源性大肠杆菌的测定结果表明,该方法与固相放射免疫分析、LT基因探针等方法的测定结果基本相符。说明被动溶血试验是一种快速、敏感和特异的检测方法,不仅可用于流行病学调查,在临床检验上也是一种可行手段。 相似文献
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产肠毒素大肠杆菌(ETEC)肠毒素LT与ST融合是ETEC多价疫苗候选株研制的一项重要工作,LT与ST的化学偶联研究已证明融合后可使小分子的ST获得免疫原性成为完全抗原,而基因融合对构建多价疫苗则是更重要的手段。本文着重介绍了近年来对LT与ST基因融合的研究,特别是一些影响基因融合效果因素的基础性研究。这些都为候选株的研制提供了研究手段和依据,并对广泛的基因融合研究具有理论意义。 相似文献
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mRNA5'端非翻译区的不同结构可影响基因表达,为了改善编码人毒素源性大肠杆菌热敏感肠毒素B亚单位的LT-B基因的表达水平,我们把该基因置于pBV220载体的P_RP_L串联启动子下游,构建了带有不同核苷酸组成的5'端非翻译区的重组体。这些重组体分别在大肠杆菌HB101和DH5α中表达。结果表明,起始密码前有两个连续串联SD序列的LT-B基因的表达水平低于只有单个SD序列下的表达水平,而翻译偶联可使表达改善;用不同的SD序列LT-B基因的表达水平也有所不同,用基因本身SD序列可能要比用pBV220P_L启动子下游的SD序列好;在只含单个LT-B基因SD序列的重组体中,5'端非翻译区序列的长短对LT-B基因表达没有什么影响;重组体在HB101中的表达水平高于在DH5α中的表达水平。 相似文献
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mRNA5'端非翻译区的不同结构可影响基因表达,为了改善编码人毒素源性大肠杆菌热敏感肠毒素B亚单位的LT-B基因的表达水平,我们把该基因置于pBV220载体的PRP1串联启动子游,构建了带有不同核苷酸组成的5'端非翻译区重组体。这些重组体。这些重组体分别在大肠杆菌HB101和DH5a中表达。结果表明,起始密码前有两个连续串联SB序列的LT-B基因的表达水平低于只有单个SD序列下的表达水平,而翻译偶 相似文献
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摘要 目的:探讨吉非替尼治疗表皮生长因子受体(EGFR)突变型晚期肺腺癌的近期疗效、毒副反应及疗效的影响因素。方法:选取2018年4月~2019年6月期间我院收治的EGFR突变型晚期肺腺癌患者97例。所有患者均给予吉非替尼治疗,观察其近期疗效及毒副反应情况。采用单因素和多因素 Logistic回归分析疗效的影响因素。结果:97例患者全部如期完成治疗,近期疗效评价:完全缓解(CR)、部分缓解(PR)、病情稳定(SD)、病情进展(PD)率分别为9.28%(9/97)、24.74%(24/97)、31.96%(31/97)、34.02%(33/97)。根据近期疗效结果将患者分为有效组(CR+PR,n=33)和无效组(SD+PD,n=64)。本研究中患者的毒副反应多为 I、Ⅱ度非血液学毒性,最常见的是皮肤毒性,如皮疹等;其他毒副反应如胃部不适、腹泻等,经对症治疗后均能缓解。单因素分析结果显示,吉非替尼治疗EGFR突变型晚期肺腺癌的疗效与性别、肿瘤临床分期、骨转移、肿瘤直径有关(P<0.05),而与年龄、肾上腺转移、脑转移、吸烟史无关(P>0.05)。多因素Logistic回归分析结果显示,性别为男性、肿瘤分期Ⅳ期是影响吉非替尼治疗EGFR突变型晚期肺腺癌疗效的危险因素(OR=1.473、2.042,P<0.05)。结论:吉非替尼治疗EGFR突变型晚期肺腺癌具有不错的近期疗效,不良反应较少,性别为男性、肿瘤分期Ⅳ期是影响吉非替尼治疗EGFR突变型晚期肺腺癌疗效的危险因素。 相似文献
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采用无毒的鼠伤寒沙门氏菌sR一1l△Cya,△Crp,△asd菌株作为宿主菌,选择相应的asd+表达载体构建了含大肠杆菌肠毒素B亚基基因(toxB)的重组质粒,并通过两次转化引入宿主菌,构成了平衡致死的重组体。特异性的测定表明,这种无抗药性的杂合菌株能较高水平地表达LT—B抗原,可望成为预防ETEC腹泻和相应的沙门氏菌病双价口服活疫苗的研究基础。 相似文献
10.
毒素源性大肠杆菌(ETEC)是可以引起幼畜腹泻
的致病菌,此类菌具有对宿主特异的起粘附定居作用
的菌毛,还有直接引起腹泻的肠毒素,目前已发现对热
敏感的肠毒素LT和对热稳定的肠毒素ST。在临床
中经常分离到的带有K88菌毛抗原的致病菌主要是
引起新生仔猪的急性腹泻,其发病、流行都比较快,是
新生仔猪死亡的一个重要原因,给畜牧业造成极大的
危害〔‘’。本实验室经过几年的研究,已经构建了具有
K88ac菌毛抗原和LT肠毒素B亚单位抗原的无毒菌
株,并已作为疫苗菌株应用于畜牧业中。但是考虑到
自然界野生型菌株生命力强,还具有多种不同的。抗
原,所以发展口服免疫的活菌苗有必要考虑上述因素。
这样当孕猪口服免疫活菌苗后,即可以产生更好的免
疫应答,刺激细胞和体液免疫系统,产生保护性伉体,
通过初乳给新生仔猪提供保护。本实验利用我们构建
的带有K88ac抗原和LT=B抗原基因的PMM085质
粒(待发表于生物工程学报,1987,和一株带有0149
抗原和K88ac抗原的野生型菌株,在用常规的Ca'十
处理受体菌转化未获成功后,又利用PEG诱导的原
生质体转化方法,把质粒PMM085转化到上述带有
014,抗原基因的野生型菌中,得到了带有K88ac,LT-B
和014,抗原基因的无毒菌株。可望此菌株能更好地
模仿自然感染致病菌株,在免疫中产生更好的预Vi作
用。 相似文献