一株青藏高原冻土溶栓菌的筛选及鉴定

【目的】心脑血管疾病是一种世界性疾病,严重危害人类健康,溶栓酶是治疗该病的有效药物之一。而极端环境中的溶栓微生物因其特殊的生存方式,可能分泌高效、安全的新型溶栓酶。因此,为了获得这种具有特殊功能的溶栓酶,我们从青藏高原高海拔冻土中进行了溶栓菌的筛选。【方法】首先,本文通过血粉-琼脂平板初步筛选具有血粉水解功能的菌株,然后对其进行体外溶栓试验以检验其人工血栓溶解功能,并用纤维蛋白平板法测定其纤溶活性,最后通过生理生化试验和16S rRNA基因序列分析方法对该菌进行分类鉴定。【结果】本文从青海省玉树藏族自治州海拔4300 m的冻土样品中筛选获得了菌株DR-536,不仅具有水解血粉的功能,还具有体外溶栓功能,且能够水解纤维蛋白,纤溶活性为51.80 IU/mL(以尿激酶为标准)。最后,分类鉴定结果显示菌株DR-536是一株金黄节杆菌(Arthrobacter aurescens)。【结论】本文首次从青藏高原高海拔土壤中进行了溶栓菌的筛选,并获得了一株新型溶栓菌,为进一步研究和开发高效、安全的新型溶栓酶提供了菌源。     

嗜麦芽寡养单胞菌(DR-929)纤溶酶的发酵条件优化及其分离纯化

本试验研究了嗜麦芽寡养单胞菌（DR-929）纤溶酶的液体发酵条件及其分离纯化。最佳发酵条件为：可溶性淀粉2.0%,黄豆粉1.0%,酵母膏0.5%,NaCl 1.0%, CaCl2 0.02%,MgSO4 0.05%,种龄36h,发酵时间4d,初始pH 8.0或9.0,温度25℃,装样量30mL,接种量5%或6%。采用发酵液离心除菌,25%～70%饱和度的硫酸铵沉淀,Phenyl FF（high sub）疏水层析,Q-Sepharose FF离子交换层析,Superdex 75凝胶过滤层析对活性成分分离纯化。用SDS-PAGE电泳对纯化效果进行检验,结果表明在SDS-PAGE中得到单一条带,分子量28.3KD。最终纯化倍数和酶活回收率分别为271.5和24.5%。