银松素合酶基因地高辛标记RNA探针的合成

目的:体外转录合成银松素合酶(PS)基因地高辛标记反义RNA探针。方法:通过双酶切把PScDNA全长序列接到pBlueskriptⅡKS( )的多克隆位点上;同时,经由NCBI比对确定PScDNA的特异序列,设计含有SalⅠ和XbaⅠ这2个酶切位点的上、下游引物,用PCR法扩增含有该位点的目的片段,并连接到pBlueskriptⅡKS( )的多克隆位点上;最后利用pBlueskriptⅡKS( )上的启动子T7,用T7RNA聚合酶在体外转录合成地高辛标记PS全长及特异序列的反义RNA探针。结果:通过对构建探针的单、双酶切,PCR及电泳鉴定,表明成功合成了PS基因地高辛标记的全长及特异序列的反义RNA探针。结论:RNA探针的合成为后续马尾松PS基因表达的RNA原位杂交研究打下了基础。     

应用RNA原位杂交技术研究马尾松针叶中银松素合酶的基因表达

以马尾松（Pinus massoniana Lamb．）银松素合酶（PS）基因为模板,体外转录合成带地高辛标记的反义RNA全长及特异探针,并用这2个探针与马尾松针叶组织石蜡切片进行原位杂交,研究该基因在马尾松针叶中的表达特性以及外界诱导因素对该基因表达的调节特性。结果表明,该基因的转录表达主要集中在针叶的韧皮部;紫外线照射和酵母提取液处理均可使该基因的转录水平明显增加。     

甘蔗叶片总蛋白提取及双向电泳条件的改进

针对甘蔗叶片中含有大量酚类和色素等干扰物质的现象．通过对甘蔗叶片蛋白样品制备、上样量和电泳条件等方面做了必要改进,建立了一套适用于甘蔗叶片蛋白质组分析的双向电泳（2-DE）方法。