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1.
促黄体激素/人绒毛膜促性腺激素受体(LH/hCG receptor)是一种与G-蛋白偶联的糖蛋白。本文报道了从大鼠卵巢cDNA库中筛选LH/hCG受体cDNA及其在昆虫细胞中的高效表达。LH/hCG受体cDNA全长2403bp,编码受体信号肽和成熟受体674个氨基酸。用多角体病毒表达载体pVL1393,LH/hCG受体cDNA在昆虫细胞中得到高效表达。在非还原和还原条件下的SDS-PAGE分析显示,用亲和层析分离纯化的受体表观分子量分别为120Kd和92Kd。经配基结合和Scatchard Plot分析表明,其与hCG反应的Kd为8.4×10~(-9)mol/L,与CHO细胞表达产物相似。 相似文献
2.
采用离子交换层析和免疫印迹法分离、纯化和分析血红素和苯肼诱导后大鼠肝脏、脑组织.结果显示:纯化诱导后的大鼠肝脏,获得 HO-1和 HO-2,前者活性高于后者为2∶1.未诱导的大鼠肝脏仅获得HO-2,但诱导剂作用后,HO-1活性明显增加,而HO-2未见改变.HO-1和HO-2表观分子质量分别为30 ku和36 ku.诱导剂未作用的肝脏及作用的脑层析后仅获得HO-2活性的洗脱峰.免疫印迹法检测发现大鼠肝脏HO-2抗体与脑HO-2间有交叉反应,与肝脏HO-1无反应.实验表明在诱导剂作用的大鼠肝脏内含HO-1和HO-2同工酶,其中HO-1为诱导型酶.诱导剂作用的脑仅含HO-2.两种构型在表观分子质量,诱导性和免疫化学特性方面明显不同. 相似文献
3.
本文以哺乳动物细胞表达载体pSV2-dhfr为运载体,构建了受控于SV40早期启动子β-hCG基因的表达载体,转染CHO-dhfr-细胞后,挑选CHO(dhfr-)细胞,结果表明β-hCG不仅在细胞中表达,还分泌到培养液中。通过氨甲喋呤(MTX)加压后,表达量逐渐提高,0.1μmol/LMTX条件下培养液中β-hCG最高表达量可达到1.5μg/106细胞·24小时。经亲和层析获得纯的重组β-hCG,其分子量与天然制品一致,放射免疫测定的免疫原性为天然制品的84.9%。 相似文献
4.
为了获得足够量的单克隆非特异性抑制因子-β蛋白(monoclonal nonspecific supressor factorβ,MNSFβ)及其抗体用于探讨MNSFβ在着床中的作用机理,本研究构建了表达质粒pBV220/MNSFβ-hCCβ,在大肠杆菌中表达了融合蛋白MNSFβ-hCCβ,用抗hCGβ抗体对表达产物进行鉴定,结果表明融合蛋白MNSFβ-hCGβ得到了正确表达,且分子量和理论值相近,表达产物MNSFβ-hCGβ经初步纯化后用于免疫Balb/C小鼠,制备抗体,同时,我们还构建了表达质粒pGEX-4T-2/MNSFβ,在大肠杆菌中表达了融合蛋白GST-MNSFβ,用融合蛋白GST-MNSFβ对融合前的免疫小鼠回忆刺激并进行检测,制备了抗MNSFβ多克隆抗体和单克隆抗体,应用所制备的多克隆抗体进行免疫组化研究,对MNSFβ在小鼠子宫内膜上进行了组织定位,结果显示,MNSFβ在着床日(受精后第4.5天)小鼠子宫非着床位点的表达和着床位点相比明显提高。 相似文献
5.
钙结合蛋白D-9K基因原核表达载体的构建、表达产物纯化及其多克隆抗体的制备 总被引:2,自引:0,他引:2
本研究构建了pBV220/CabpD-9k-βhCG表达质粒,在大肠杆菌TG-1中进行表达,得到了CabpD-9k-βhCG融合蛋白。SDS-PAGE分析显示融合蛋白的分子量约为34.5KD。Western blot结果表明,融合蛋白与兔抗人hCGIgG特异结合。用纯化的融合蛋白免疫C57BL小鼠,制备了多克隆抗体,这为进一步研究钙结合蛋白D-9K在着床中的功能和子宫内膜Ca2+信号转导奠定了基础。 相似文献
6.
本文报道改进的三酯法的建立,并用此法化学合成了脱氧十二核苷酸dCCACAATGAT-AG。其改进之点包括:(1)采用较稳定的保护基,如以对甲氧三苯甲基(MMT)保护核苷的5′羟基,以苯甲酰基保护鸟核苷碱基上的氨基;(2)以3′和5′羟基都不保护的核苷或片段作中间体,它们容易制备,也容易从产物中分离除去;(3)采用高效和稳定的均三甲基苯磺酰硝基三唑为缩合剂;(4)以7M尿素中性(pH7.5)和酸性(pH3.5)阴离子交换柱层析结合使用,分离纯化得到较纯的完全脱去保护基的最终产物,避免了高压液相柱层析的应用。 相似文献
7.
hCGβ-CTP37多聚体的表达、纯化及其多克隆抗体的制备 总被引:3,自引:0,他引:3
目的:研究重组hCGβCTP37(CTP)多聚体编码基因在大肠杆菌BL21中的表达及表达产物多克隆抗体的制备。方法:分别将3、4个CTP编码基因通过串联的方式连接起来组成多聚体编码基因,进而将多聚体基因亚克隆入载体pGEX4T2中获得含目的基因的表达质粒pGEX4T2(CTP)n(n=3,4)。表达质粒转入大肠杆菌BL21,目的蛋白在IPTG诱导下进行表达。表达产物经谷胱甘肽转硫酶(GST)亲和层析柱纯化、凝血酶酶解去除GST后,获得多肽CTP3和CTP4。将其用于免疫家兔以制备多克隆抗体,并用ELISA法检测抗体滴度。结果:菌株经IPTG诱导后产生了大量可溶性的融合蛋白GSTCTPn(n=3,4),SDSPAGE分析表明融合蛋白GSTCTP3和GSTCTP4的表观分子量分别为38.0kDa和42.2kDa,纯化后的融合蛋白的纯度达到了90%以上;纯化的融合蛋白经牛凝血酶酶解,利用制备型SDSPAGE纯化,回收获得的多肽CTP3和CTP4的纯度均大于80%;将多肽CTP3和CTP4多次免疫家兔后,ELISA检测结果证实产生了滴度较高的多克隆抗体。结论:CTP多聚体能刺激家兔产生特异性抗体,这提示CTP多聚体有可能作为避孕疫苗或肿瘤疫苗的免疫原。 相似文献
8.
拟通过RNA干扰技术特异下调人血红素加氧酶-1(human heme oxygenase-1,hHO-1)基因的表达,减少hHO-1的产量从而降低胆红素的产生,探讨在胆红素产生前就阻断其产生,为临床早期防治新生儿高胆红素血症及胆红素中毒性脑病探索一种新的有效手段。针对hHO-1基因设计并化学合成三对小分子干扰RNA(small interfering RNA,siRNA)。采用脂质体转染法将siRNA转染入人肝脏细胞株HL-7702;荧光显微镜检测siRNA转染细胞的效率;转染siRNA1~2天后经RT-PCR和Western印迹方法检测hHO-1表达水平和蛋白质量;并采用HO-1诱导剂血红素诱导或hHO-1表达质粒转染细胞以上调hHO-1表达,检测siRNA干扰后hHO-1产量和酶活性。结果显示:设计的三对siRNA能不同程度的特异下调hHO-1表达,筛选获得抑制效果最佳的siRNA-3。siRNA-3抑制hHO-1呈现浓度与时间依赖性。与非特异对照siRNA及未处理组比较,血红素诱导和hHO-1表达质粒转染均能上调HL-7702细胞内hHO-1表达,提高hHO-1产量,但转染siRNA-3后hHO-1表达明显抑制,同时hHO-1活性随着基因表达下调而下降。实验表明设计合成的siRNA-3抑制效果明显。siRNA-3通过降解hHO-1,减少hHO-1产量,降低酶活性,最终减少胆红素产生,从而使RNA干扰技术成为降低新生儿高胆红素血症和胆红素中毒性脑病发生的一种候选方法。 相似文献
9.
异种移植排斥反应的主要特征为内皮细胞发生Ⅱ型激活,引起黏附分子、细胞因子和前促凝分子等基因高表达,造成血管收缩、白细胞黏附、激活、聚集和血栓形成,最终导致内皮细胞凋亡。保护基因HO-1通过抑制前炎症反应及免疫调抑作用以保护异种移植器官。因此,通过构建含剪切的野生型大鼠HO-1 cDNA的表达型质粒,用DOTAP包裹转入HUVEC中表达,测定表达量及表达产物活性;采用TNF-α诱导细胞凋亡,以及Heme和SnPP分别刺激细胞,诱导和抑制细胞内HO-1表达量,流式细胞仪测定细胞凋亡率,明确HO-1的抗细胞凋亡作用。结果显示HO-1在HUVEC中高度表达,活力为对照组5倍;TNF-α诱导细胞凋亡,但Heme处理后细胞凋亡率下降至20%以下,而SnPP处理后细胞凋亡率显著上升,最高达到95%以上,并且HO-1基因表达抑制时细胞凋亡率是诱导时的5-20倍。本实验表明Heme处理后HO-1表达上调,具有显著抗细胞凋亡作用,细胞凋亡率与HO-1表达量呈负相关,提示HO-1通过抑制细胞凋亡,对细胞有保护作用。 相似文献
10.
人绒毛膜促性腺激素(human chorionicgonadotroPin,简称hCG)是由胎盘滋养层细胞合成的一种糖蛋白激素,在早期妊娠中具有重要作用。hCG由α、β两个亚基组成,α 相似文献