苏云金杆菌内毒素蛋白基因转入葡萄胚性愈伤组织细胞及转基因植株再生的研究

以葡萄的胚性愈伤组织作为农杆菌介导,Ti质粒转化材料,利用共培养法将苏云金杆菌内毒素蛋白基因转入葡萄胚性愈伤组织细胞,通过胚状体发生途径再生转基因植株。实验发现:80μmol/L的乙酰丁香酮诱导处理农杆菌和葡萄愈伤组织后可将转化效率提高50倍。OD值为0.8的农杆菌菌液稀释8—10信后与在G培养基预培养10天的胚性愈伤组织共培养2—3夭,Ti质粒对葡萄愈伤组织细胞的转化效率可达50%左右。筛选得到的转基因植株在含Km 30 mg/L的选择培养基上继代存活6个月,生长正常;提取叶片染色体DNA做Southern blot,杂交结果为阳性。将转基因植株各部分切段置于含Km 50 mg/L的选择培养基上,能够脱分化产生抗性愈伤组织并能增殖。     

君子兰胚性愈伤组织无性系的建立及“一次成苗”的研究

君子兰(Clivia miniata)是石蒜科的多年生草本植物,为我国名贵花卉,经济价值较高。一般采用营养育苗或种子育苗,但繁殖系数低,速度慢。本文通过组织培养技术,采用君子兰子房组织为外植体,进行了愈伤组织诱导及植株再生的研究。经6年多试验,获得了在诱导培养基上“一次成苗”的试验结果,建立了能长期保持高分化潜力的胚性愈伤组织无性系。这一试验结果,不仅简化了成苗的程序,提高了繁殖系数;而且有助于开展体细胞无性系变异和突变体筛选的研究,具有一定的应用价值。