阿司匹林通过调节Hippo途径抑制大鼠颅内动脉瘤的形成和机制

摘要 目的：探讨阿司匹林通过调节Hippo途径抑制大鼠颅内动脉瘤形成的机制。方法：选择40只健康SD大鼠分为对照组（不做任何处理）、假手术组（暴露双侧肾动脉后支和左颈总动脉,但不结扎）、动脉瘤组（结扎双侧肾动脉后支和左颈总动脉后生理盐水灌胃）和阿司匹林组（动脉结扎后阿司匹林灌胃）,各10只。灌胃12周后检测血清炎性因子[肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、单核细胞趋化蛋白-1（MCP-1）、白细胞介素-6（IL-6）、IL-10]、血管内皮损伤标志物[一氧化氮（NO）、内皮素-1（ET-1）、血管内皮生长因子（VEGF）]。处死大鼠后,检测动脉瘤大小、壁厚比、内腔面积和中膜变薄长度,检测动脉瘤血管组织中Yes相关蛋白（YAP）表达情况。结果：（1）动脉瘤组和阿司匹林组大鼠Willis环上有明显凸起,且阿司匹林组大鼠凸起明显小于动脉瘤组。阿司匹林组大鼠动脉瘤大小、内腔面积和中膜变薄长度均显著小于动脉瘤组,壁厚比显著大于动脉瘤组（P＜0.05）。（2）动脉瘤组和阿司匹林组大鼠血清TNF-α、MCP-1、IL-6水平显著高于对照组和假手术组,IL-10水平显著低于对照组和假手术组（P<0.05）;阿司匹林组大鼠血清TNF-α、MCP-1、IL-6水平显著低于动脉瘤组,IL-10水平显著高于动脉瘤组（P<0.05）。（3）动脉瘤组和阿司匹林组大鼠血清NO水平显著低于对照组和假手术组,ET-1和VEGF水平显著高于对照组和假手术组（P<0.05）;阿司匹林组大鼠血清NO水平显著高于动脉瘤组,ET-1和VEGF水平显著低于动脉瘤组（P<0.05）。（4）动脉瘤组和阿司匹林组大鼠YAP蛋白表达相对吸光值显著高于对照组和假手术组（P<0.05）;阿司匹林组大鼠YAP蛋白表达相对吸光值显著低于动脉瘤组（P<0.05）。结论：阿司匹林能够显著减轻颅内动脉瘤大鼠炎性反应,改善血管内皮功能,抑制颅内动脉瘤形成,这可能与阿司匹林调控Hippo信号通路有关。     

miR-96-5p靶向FOXO1调节脑缺血再灌注损伤机制

摘要 目的：探究miR-96-5p在脑缺血再灌注损伤（CIRI）中的作用及机制。方法：通过qRT-PCR检测36例确诊的缺血性脑卒中患者（IS患者组）和30例健康体检者（健康组）的血清miR-96-5p水平。将PC12细胞分为5组：对照组、NC-ag组、miR-96-5p-ag组、NC-an组、miR-96-5p-an组。采用Lipofectamine 2000对PC12细胞进行转染,通过qRT-PCR验证转染效率。将PC12细胞分为6组：对照组、氧糖剥夺/复氧复糖（OGD/R）组、OGD/R+NC-ag组、OGD/R+miR-ag组、OGD/R+NC-an组、OGD/R+miR-an组。根据分组对PC12细胞进行OGD/R处理和转染。通过MTT法检测PC12细胞活力,TUNEL法检测PC12细胞凋亡。采用改良Longa法建立大鼠CIRI模型,然后将大鼠分为假手术组、CIRI组、CIRI+NC-an组和CIRI+miR-an组。假手术组和CIRI组大鼠尾静脉注射生理盐水,CIRI+NC-an组和CIRI+miR-an组大鼠分别尾静脉注射NC-antagomir和miR-96-5p-antagomir。然后检测各组大鼠的神经功能评分、脑梗死体积和脑组织细胞凋亡情况。按照试剂盒说明书测定PC12细胞和大鼠脑组织中MDA、SOD和GSH-Px的含量。通过qRT-PCR检测PC12细胞和大鼠脑组织miR-96-5p和Forkhead box O1（FOXO1） mRNA水平,通过Western blot检测FOXO1、Ac-FOXO1、Bax和Bcl-2的蛋白表达水平。结果：与Health组比较,IS组患者的血清miR-96-5p水平显著升高（P<0.001）。与对照组和NC-ag组比较,miR-96-5p-ag组的miR-96-5p水平升高,FOXO1的mRNA和蛋白表达水平均降低,FOXO1的乙酰化水平升高（P<0.05）。与对照组和NC-an组比较,miR-96-5p-an组的miR-96-5p水平降低,FOXO1的mRNA和蛋白表达水平均升高,FOXO1的乙酰化水平降低（P<0.05）。与OGD/R组和OGD/R+NC-an组比较,OGD/R+miR-an组的相对细胞活力升高,TUNEL阳性率降低,Bax的蛋白相对表达量降低,Bcl-2的蛋白相对表达量升高,MDA水平降低,SOD和GSH-Px水平升高,miR-96-5p水平降低,FOXO1的mRNA和蛋白表达水平升高,FOXO1的乙酰化水平降低（P<0.05）。与CIRI组和CIRI+NC-an组比较,CIRI+miR-an组大鼠的神经功能评分和脑梗死体积降低,TUNEL阳性率降低,Bax的蛋白相对表达量降低,Bcl-2的蛋白相对表达量升高,MDA水平降低,SOD和GSH-Px水平升高,miR-96-5p水平降低,FOXO1的mRNA和蛋白表达水平升高,FOXO1的乙酰化水平降低（P<0.05）。结论：miR-96-5p在CIRI发生过程中表达上调,而下调miR-96-5p表达可能通过负调控FOXO1以减轻CIRI程度。