aroA-In融合基因载体的构建、表达及对烟草的转化

PCR扩增突变的5’-烯醇丙酮酸莽草酸-3-磷酸合成酶(5’-enolpyruvylshikimate-3-phosphate synthetase,EPSPS)cDNA全长序列,插入pLitmus28得到pLEPSPS,进而通过反向PCR在EPSPS235／236aa之间将其打断为无功能的片段。选用人工构建的具有顺式和反式剪接功能的mini型蛋白内含子Ssp DnaB和Rma DnaB,插入被打断的aroA(抗除草剂基因),构建了质粒pLEBC、pLEBT、pLERC和pLERT。将4种重组质粒中的aroA-In(蛋白内含子Intein插入aroA)融合基因插入pET-32得到表达载体pETLEBC、pETLEBT、pETLERC和pETLERT,lPTG诱导后,SDS-PAGE分析显示其能在DE。中有效表达并发生相应的蛋白剪接。将aroA-cis Ssp DnaB和aroA-cis Rma DnaB融合基因分别插入pLYM中进一步构建成植物表达载体,农杆菌叶盘法转化烟草。基因组PCR分析表明融合基因整合入植物核基因组;RT-PCR分析显示其可在高等植物细胞中成功表达。结果说明蛋白内含子基因可以转化高等真核细胞,蛋白剪接技术可应用于高等植物细胞,从而为防止植物转基因扩散提供了一条新的途径。     

Effect of Plant AntifreezeProteins on Porcine Embryo to Cryopreservaton

ＥｆｆｅｃｔｏｆＰｌａｎｔＡｎｔｉｆｒｅｅｚｅＰｒｏｔｅｉｎｓｏｎＰｏｒｃｉｎｅＥｍｂｒｙｏｔｏＣｒｙｏｐｒｅｓｅｒｖａｔｏｎ￥ＦＥＩＹｕｎ－ｂｉａｏ（费云标）;ＷＥＩＬｉｎｇ－ｂｏ（魏令波）;ＧＡＯｓｕ－ｑｉｎ（高素琴）;ＺＨＡＯＳｈｕ－ｈｕｉ（赵...