小鼠胚胎干细胞（ES—M13）核骨架—核纤层—中间纤维结构体系的研究

本文使用细胞的选择性抽提、ＤＧＤ包埋去包埋电镜制样、免疫荧光和免疫印迹技术研究了小鼠胚胎干细胞（ＥＳ－Ｍ１３）的核骨架－核纤层－中间纤维结构体系。在电镜下可以看到,ＥＳ细胞存在精细发达的核骨架结构,核骨架纤维同核纤层结构相连接,细胞质中有许多直径为１０ｎｍ的中间纤维单丝,细胞质中有许多直径为１０ｎｍ的中间纤维单丝,在免疫荧光分析中,使用角蛋白单克隆抗体有阳性反应,细胞质区域可以看到较强的荧光,没有     

小鼠胚胎干细胞(ES-M_(13))核骨架-核纤层-中间纤维结构体系的研究

本文使用细胞的选择性抽提、DGD包埋去包埋电镜制样、免疫荧光和免疫印迹技术研究了小鼠胚胎干细胞(ES-Ml_(13))的核骨架-核纤层-中间纤维(NM-L-IF)结构体系。在电镜下可以看到,ES细胞存在精细发达的核骨架结构,核骨架纤维同核纤层结构相连接,细胞质中有许多直径为10nm的中间纤维单丝。在免疫荧光分析中,使用角蛋白单克隆抗体有阳性反应,细胞质区域可以看到较强的荧光,没有极性分布现象,也没有观察到纤维状的荧光染色。ES细胞对波形蛋白和结蛋白抗体呈阴性反应,同对照组一样,只能看到非特异性的很微弱的荧光染色。在免疫印迹分析中,使用角蛋白单克隆抗体AF6检测到三条角蛋白多肽,分子量分别为65KD,62KD和52KD。     

癌基因EJ－ras在小鼠胚胎干细胞（ES－5）中的表达及其对ES－5细胞一些特征的影响

转基因动物在研究基因的功能、医药、畜牧业等方面有重要的应用。利用胚胎干细胞（ＥＳ）制作转基因动物,比传统的显微注射法有无可比拟的优点。但是,目前、只在小鼠中建立起了ＥＳ细胞系,在其它哺乳动物（包括家畜）中尚未建成。近来,人们开始探索：改变胚胎细胞的遗传物质（如：把外源基因导入胚胎细胞）是否有利于获得ＥＳ细胞系．在各种外源基因中,癌基因是值得尝试的基因。因为：（１）ＥＳ细胞的建系是使胚胎的ＩＣＭ细胞永生化的过程;（２）在体外利用癌基因转染可使许多原代培养细胞永生化;（３）ＥＳ细胞高表达一些原癌基因。我们用癌基因ＥＪ－ｒａｓ转染小鼠ＥＳ细胞,观察其对ＥＳ－５细胞一些特性（增殖、嵌合能力）的影响,以便选择合适的癌基因用于家畜ＥＳ细胞的建系。ＥＳ－５细胞通常培养在丝裂霉素处理的小鼠胚胎成纤维细胞（ＭＥＦ）上（Ｆｉｇ．Ａ）。转染用ＥＳ－５细胞培养在无饲养层细胞的、含有大鼠肝细胞（ＢＲＬ）的条件培养液ＤＭＥＭ中。ＥＪ－ｒａｓ基因克隆在真核表达载体ＰＳＶ２ｎｅｏ的ＢａｍＨＩ位点上、使用磷酸钙法转染ＥＳ－５细胞,Ｇ－４１８法筛选阳性克隆,得到的抗性克隆仍以集落形式生长（Ｆｉｇ．Ｂ）,选取５个较好的克隆（ＥＳ－ｒａｓ１,２,     

鼠胚成纤维细胞中间丝—核纤层—核骨架结构体系的研究

本文以１２．５天小鼠胚胎成纤维细胞为材料,使用择性抽提和整装细胞电镜制技术,显示了鼠胚成纤维细胞的中间丝－核纤层－核内架（ＩＦ－Ｌ－ＮＭ）结构体系。细胞质中有非常发达的中间丝,有的纤丝结合为束状存在,纤丝沿着核呈一定方向平行排列。细胞中也可以观察到核纤层和核骨架结构,但同胞质中间丝相比,核骨架不发达。整装细胞电镜制样使观察到的ＩＦ－Ｌ－ＮＭ更具有真实感和立体感,应用音接免疫荧光技术检测细胞内的中间