不同程度内质网应激对ApoE-/- 小鼠动脉粥样硬化斑块稳定性的影响

目的:采用Apo E-/-小鼠建立不稳定动脉粥样硬化斑块模型,给予不同剂量衣霉素,观察其对动脉粥样硬化斑块稳定性的影响。方法:取40只6-8周的Apo E-/-小鼠随机分为对照组和手术组。对照组小鼠给予正常饮食;手术组小鼠行右侧颈总动脉套管术(Perivascular carotid collar placement,PCCP),同时给予高脂喂养。9周末分别取对照组和手术组小鼠颈动脉,HE染色观察小鼠颈动脉斑块形成情况。成功造模后,将小鼠随机分为正常对照组、单纯PCCP组、小剂量衣霉素组和大剂量衣霉素组;正常对照组和单纯PCCP组给予生理盐水腹腔注射,小剂量衣霉素组和大剂量衣霉素组分别给予小剂量衣霉素、大剂量衣霉素腹腔注射。2周后,处死小鼠,通过HE染色观察颈动脉斑块形态,油红O染色观察斑块内脂质聚集,抗巨噬细胞免疫组化染色观察斑块内巨噬细胞聚集,Western-blot检内质网应激标志蛋白GRP78和自噬标志蛋白Atg7、P62的表达水平。结果:HE染色结果显示:与单纯PCCP组和大剂量衣霉素组相比,小剂量衣霉素组颈动脉腔内的斑块脂质池减少,斑块结构较为完整且相对稳定;油红O染色结果显示:小剂量衣霉素组斑块内脂质含量显著降低(P0.05 vs单纯PCCP组和大剂量衣霉素组);巨噬细胞免疫组化染色显示:与单纯PCCP组和大剂量衣霉素组相比,小剂量衣霉素组斑块内巨噬细胞的含量显著降低(P0.05);Western-blot结果显示:小剂量衣霉素干预诱导的一定程度的内质网应激可以适度上调自噬(P0.05 vs单纯PCCP组和大剂量衣霉素组)。结论:PCCP手术加高脂饮食可以短期成功建立小鼠不稳定动脉粥样硬化斑块模型,其动脉粥样硬化斑块不稳定性较高,而小剂量衣霉素干预可以使得颈动脉管腔内斑块相对较小,内部脂质池明显较小,纤维帽变厚且结构更完整,斑块结构较稳定;斑块内脂质含量降低;巨噬细胞含量明显降低,且小剂量衣霉素组自噬水平适度上调。因此,小剂量衣霉素干预引起的适度的内质网应激一定程度对动脉粥样硬化斑块起到保护作用。     

早产儿发生原因及并发症临床分析

目的:回顾分析以往早产儿的临床资料,总结经验,以改善早产儿的生存质量,提高医疗水平.方法:对2006年1月至2008年12月在我院出生的1080例早产儿进行回顾性分析,按不同孕周分为35～37周组、32～35周组以及＜32周组,对3组早产儿的早产原因,合并症的情况进行回顾性分析.结果:胎膜早破是引起早产最主要的原因,其他依次为妊娠期感染,不明原因的自然早产,妊娠期高血压疾病、多胎、胎盘因素及胎儿宫内窘迫.早产儿的并发症中以高胆红素血症,贫血,肺炎,低血糖为主,胎龄＜32周组出现各种合并症的概率＞35～37周组和32～35周组,差异有统计学意义.结论:加强围产期保健指导工作,积极防治早产高危因素,提高早产儿的救治水平,可以改善早产儿的生存质量.     

根癌农杆菌介导麝香百合遗传转化体系的建立

以麝香百合"white elegance"叶片为外植体,通过根癌农杆菌介导法,研究了影响其转化的因素,建立了稳定而高效的麝香百合遗传转化体系。结果表明,以叶片为受体材料,外植体预培养有利于农杆菌的侵染;3 d的共培养,根癌农杆菌OD600值为0.6左右、侵染10 min,能获得较高的转化率;50 mg.L-1的卡那霉素对叶片有很好的筛选效果。抗性植株经PCR检测,初步证明Mn-SOD基因已转入到麝香百合植株中。     

小鼠血管壁CD34+干细胞的分离、培养及鉴定

血管壁干细胞(vascular wall-resident stem cells, VW-SCs)在维持血管正常功能以及损伤血管的修复过程中发挥着关键性的作用,对其功能特性的研究将有助于干细胞的调控及应用。本文旨在建立稳定的VW-SCs分离、培养及分选鉴定技术,为进一步深入研究VW-SCs在生理和疾病状态下的增殖、迁移和分化等机制提供丰富、可靠的细胞来源。首先利用组织块贴壁法获取小鼠主动脉外膜以及肠系膜动脉血管壁细胞,传代培养到细胞数量至少达到1×10⁷后经磁珠分选和流式细胞术鉴定CD34⁺的VW-SCs;其次采用细胞免疫荧光染色检测干细胞标志物(CD34、Flk-1、c-kit、Sca-1)以及平滑肌标志物(SM22、SM MHC)、内皮标志物(CD31)和细胞核内分裂增殖相关蛋白(Ki-67);血管壁CD34+干细胞的定向分化采用EBM-2内皮分化诱导培养基和FM-2成纤维细胞培养基分别培养7天和3天;利用细胞免疫荧光染色和q-PCR检测内皮细胞标志物(CD31, VWF)和成纤维细胞标志物(Vimentin, PDGFRα)的表达。此外...     

基于rDNA-ITS2序列的中国按蚊属塞蚊亚属部分种类的系统发育研究(双翅目:蚊科)

应用rDNA-ITS2序列,采用邻接法(NJ)、最大简约法(MP)和最大似然法(ML),以按蚊亚属Anopheles的中华按蚊An.(An.)sinensis和赫坎按蚊An.(An.)hyrcanus为外群,对采自中国的按蚊属Anopheles塞蚊亚属Cellia 21种蚊进行了系统发育分析.结果表明:rDNA-ITS...     

178例难治性感染症厌、需氧菌及L型培养检测分析

从检材中培养出细菌是确立感染 (败血 )症诊断和治疗的基本依据 ,而传统有氧条件的培养方法易漏诊厌氧菌和缺壁细菌 ,不能概括致病原因菌的全貌 ,为了提高阳性检出率 ,缩短培养时间 ,我室于 2 0 0 0年 7月～ 2 0 0 1年 12月 ,采用同步培养法对 178例感染 (败血 )症的病人进行培养 ,检测报告如下。1　材料与方法1.1　标本来源　临床诊断为感染 (败血 )症的患者血液标本13 8例 ,中段尿 2 3例 ,胸、腹水及关节液 12例 ,脑脊液 5例。1.2　培养基　厌氧、需氧菌及 L型同步培养基由康健生物技术公司出品 ,细菌分离鉴定培养基为自制 ,药敏纸片由中…     

复合性感染的复数菌药敏实验分析

从检材中培养出细菌是确立感 (传 )染性疾病诊断和治疗的基本依据 ,单一需氧菌的培养方法易遗漏厌氧菌和缺壁细菌 ,不能概括致病原因菌的全貌 [1 ] ,使多种类细菌的混合性感染不能准确诊断和治疗。我室于 1999年接待了用常规方法仅培养部分需氧菌或未培养出细菌的检材 3例 (血 1例、腹水 1例、尿 1例 ) ,同时进行需氧菌、厌氧菌及细菌 L型培养 ,检测结果报告如下 :1　材料与方法1.1　标本来源　标本来自本市医院患儿 3例 ,拟诊为“败血征”血 1例 ,诊断为“脾亢”腹水 1例 ,诊断为“膀胱炎”尿 1例。1.2　培养基1.2 .1　需氧菌 (简称 X)培…     

抗重组人表皮生长因子单克隆抗体的制备及生物学特性鉴定

建立能稳定分泌特异性抗重组人表皮生长因子(rhEGF)单克隆抗体的杂交瘤细胞株 ,制备出高效价的 ,具有生物学活性的抗重组人表皮生长因子单克隆抗体 ,为EGF及其单克隆抗体在肿瘤生长调节中的作用研究 ,为肿瘤的诊断与治疗提供具有实用价值的研究工具。此外 ,为EGF的亲和层析纯化提供材料。以BALB/c小鼠脾细胞为饲养细胞 ,运用细胞杂交瘤技术制备 ,间接ELISA法筛选出能稳定分泌针对人表皮生长因子的单克隆抗体细胞株 ;对杂交瘤细胞进行染色体核型分析并以体内诱生法产生腹水以获得大量单克隆抗体 ,并采用HiTrapProteinAHP柱对其纯化…     

128例尿培养结果分析

尿路感染是临床最常见的感染之一。尿路感染多为细菌引起 ,这些细菌多与人类生活、环境和自身体表的细菌有关。而细菌 L 型又是尿路感染较常见的细菌之一。 L 型细菌培养国内外已开展多年 ,我室一直在进行需氧菌、厌氧菌、L 型细菌同步培养法 ,现将我们所做的 12 8例中段尿标本培养结果分析报告如下。1　材料与方法1.1　标本来源　临床诊断急性、慢性尿路感染患者的中段尿12 8例。1.2　材料　厌氧、需氧及 L型同步培养基 ,由康健生物技术公司出品 ;细菌分离培养基 ,为自制 ;细菌生化反应管 ,由浙江省军区后勤部卫生防疫检验所提供。1.3　…     

西伯利亚白刺质膜Na+/H+逆向转运蛋白基因NsSOS1的分离及表达分析

采用同源克隆技术分离了西伯利亚白刺(Nitraria sibirica)质膜Na~+/H~+逆向转运蛋白基因NsSOS1,并对其在不同胁迫条件下的表达特性进行了分析。NsSOS1包含3 516bp开放阅读框(ORF),编码1 171个氨基酸,蛋白分子量为128.34kD。生物信息学分析显示,NsSOS1包含12个跨膜结构域,具有植物SOS1蛋白的保守结构域。系统发育分析表明,NsSOS1与其他植物质膜Na~+/H~+逆向转运蛋白处于同一个次级分化群,与锦葵科海滨锦葵KvSOS1亲缘关系较近。实时荧光定量RT-PCR分析显示,NsSOS1基因在西伯利亚白刺的根和叶中表达量较高;其表达受到非生物胁迫(NaCl、低温、干旱)和外源激素(MeJA和GA)的诱导,表明NsSOS1基因在西伯利亚白刺抵御逆境胁迫过程中发挥重要作用。