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利用RT-PCR法,从人胰腺组织扩增出SNAP25基因,定向克隆至pENTR-TOPO载体获得重组质粒pENTR/D-TOPO-SNAP25。经PCR及测序验证其阅读框正确。再与腺病毒载体pAD／CMV／V5一DEST 发生LR重组反应,SNAP25取代pAD／CMV／V5一DESTTM中的ccdB-CmR基因,获得重组腺病毒载体pAD／CMV／V5一DEST-SNAP25(pAD- SNAP25)。重组腺病毒载体经Pac I酶切,脂质体法转染HEK-293A细胞．以鼠抗人SNAP25单克隆抗体为一抗,做荧光及Western Blot检测,结果表明重组腺病毒pAD-SNAP25在HEK-293A细胞中包装成功。重组腺病毒pAD-SNAP25感染大鼠胰岛,结果表明在高糖浓度下,外源性SNAP25蛋白的表达促进了大鼠胰岛素分泌。 相似文献
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