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目的探讨自噬相关蛋白12 (ATG12)对缺氧缺血性脑病(HIE)小鼠细胞凋亡和自噬的影响及分子机制。
方法通过尾静脉注射腺相关病毒构建ATG12低表达小鼠模型,将40只小鼠分为假手术组、HIE模型组、对照病毒模型(NC-HIE)组和ATG低表达病毒模型(ATG12 shRNA-HIE)组,HIE模型组小鼠左侧颈动脉结扎后低氧(8﹪氧气+92﹪氮气)处理2.5?h,假手术组不予结扎和低氧处理。缺氧处理后,荧光定量PCR检测脑组织ATG12 mRNA表达水平。比色法检测各组小鼠大脑神经细胞SOD和MDA水平;通过Tunel法检测各组小鼠大脑神经细胞凋亡水平;通过Western Blot检测各组小鼠大脑神经细胞LC3A/B、ATG12和SQSTM1/?p62蛋白表达水平。采用t检验和单因素方差分析对实验数据进行统计分析。
结果与假手术组小鼠脑组织ATG12 mRNA水平(1.00±0.14)相比,HIE模型组小鼠脑组织ATG12 mRNA水平(5.23±0.37)显著升高(t?= 33.60,P?< 0.01);与假手术组小鼠脑组织超氧化物歧化酶(SOD)活性[(103.60±4.84)?U/?mgprot]和丙二醛(MDA)含量[(42.40±3.17)?μmol/?mgprot]比较,HIE模型组小鼠脑组织SOD活性[(62.60±3.44)?U/?mgprot]显著降低,MDA含量[(83.80±4.39)?μmol/?mgprot]显著升高,与NC-HIE组小鼠脑组织SOD活性[(61.20±4.39)?U/mgprot]和MDA含量[(85.20± 2.70)?μmol/?mgprot]比较,ATG12 shRNA-?HIE组小鼠脑组织SOD活性[(93.80± 5.43)?U/?mgprot]显著升高,MDA含量[(49.20±3.49)?μmol/mgprot]显著降低,差异具有统计学意义(F?= 222.7,P?< 0.01;F?=?415.8,P?0.01)。Tunel结果显示,与假手术组比较,HIE模型组小鼠脑组织凋亡程度升高,与NC-HIE组比较,ATG12 shRNA-HIE组小鼠脑组织凋亡程度降低。Western Blot结果显示,与假手术组小鼠脑组织ATG12、LC3A/B和SQSTM1/?p62蛋白(0.14±0.03,0.13±0.02,0.53±0.03)比较,HIE模型组小鼠脑组织ATG12和LC3A/?B蛋白表达(0.49±0.04,0.45±0.03)显著升高,SQSTM1/p62蛋白表达(0.24±0.03)显著降低,与NC-?HIE组小鼠脑组织ATG12、LC3A/B和SQSTM1/p62蛋白(0.46±0.03,0.45±0.03,0.25±0.03)比较,ATG12 shRNA-HIE组小鼠脑组织ATG12和LC3A/B蛋白表达(0.13±0.02,0.16±0.03)显著降低,SQSTM1/p62蛋白表达(0.53±0.04)显著升高,差异具有统计学意义(F?= 432.9,P?< 0.01;F?= 437.5,P?< 0.01;F?= 301.9,P?< 0.01)。
结论降低ATG12表达能够抑制小鼠大脑神经细胞氧化应激,缓解HIE小鼠大脑神经细胞凋亡和自噬水平,抑制脑损伤。 相似文献
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动物T细胞受体(T cell receptor,TCR)基因由多个不同的高度同源的基因家族组成,通过全基因组测序很难获得准确的基因序列和排列位置。文章通过在NCBI中发布的鸡TCR的γ链(TCRγ或TRG)基因片段序列定位了鸡TRG基因所在区域,并确定了与鸡TRG基因位点对应的细菌人工染色体(BAC)克隆(CH261-174P24)。对该克隆进行高通量的重新测序和组装后,得到含有10个scaffolds的基因组草图,较完整地覆盖了鸡TRG基因位点及两侧区域。通过PCR扩增和测序证明了scaffold内部结构的正确性,校正了鸡参考基因组TRG基因位点一个可变基因和一个缺口序列(gap)附近各一处错误序列,以及可变基因区多处序列错误。文章通过校正鸡参考基因组TRG基因位点的序列,为鸡TRA/D和TRB基因位点的基因组序列分析提供了新方法。 相似文献
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