响应曲面法优化毛细管区带电泳分析rhEPO的方法

为了在采用国内常用的60cm毛细管柱检测的条件下,能够完全分离检测重组人促红细胞生成素(rhEPO)8个组分,运用响应面分析法(RSM)对《欧洲药典》中规定的rhEPO的毛细管区带电泳检测法所用缓冲液组成作细微调整,以达到pH值操作允许范围略加宽松,易于控制,又保证所有组分清晰分离的目的。数学分析得到的缓冲液组分为:12 mmol/L氯化钠,12 mmol/L麦黄酮,12 mmol/L醋酸钠,3.0 mmol/L腐胺;用此缓冲液,pH值可拓宽至5.2~5.8范围内。实例检测验证结果表明,采用60 cm毛细管柱,在此缓冲液条件下检测样品,pH值在5.2~5.8范围内,rhEPO的8个糖基化形式在38 min内实现了基线分离,各相邻峰间的分离度达1.63~3.29,柱效达每米1.63×105~3.23×105理论塔板数,峰形良好。本研究提供了一个可行、可靠、高效的rhEPO分析方法。