反相高效液相色谱法测定血浆游离氨基酸

本文报告了采用高效液相色谱法反相梯度洗脱,邻苯二甲醛和β-巯基乙醇柱前衍生化,荧光检测分血浆游离氨基酸。实验采用线性洗脱,在50分钟内可同时测定18种氨基酸,血浆样品的预处理简单,衍生化反应的时间仅需1分30秒,血浆样品的实际进样量少于1μl。本测定方法的精确度高,各个氨基酸保留时间的变异系数平均为0.89%±0.45%(SD),峰面积的变异系数平均为2.06%±1.76%(SD),各个氨基酸的浓度在15—150μmol/L的范围中,线性关系的相关系数平均为0.985±0.0305(SD)。准确性好,各个氨基酸的回收率平均为97.6%±5.1%(SD)。实验还讨论了氨基酸分离时溶液pH值、柱温、离心速度等因素对分析结果的影响。