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为了研制戊型肝炎新型基因工程疫苗,利用汉逊酵母表达系统表达重组戊型肝炎病毒样颗粒,成功构建了重组戊型肝炎疫苗工程菌株HP/HEV2.3,对该菌株的发酵条件和纯化工艺进行了研究。先将工作种子批进行发酵培养,收集发酵后的细胞培养物;对其先后进行细胞破碎、澄清和超滤、硅胶吸附和解吸附、超滤浓缩换液、色谱纯化及除菌过滤,制得重组汉逊酵母戊型肝炎病毒样颗粒,纯化收率为33%,纯度达99%;电镜观察显示该重组汉逊酵母戊型肝炎病毒样颗粒与天然戊型肝炎病毒颗粒理论大小一致,为32 nm;基因序列与理论一致;SDS-PAGE分析结果表明其表达的外源蛋白质分子量与预期的目的蛋白质分子量大小一致,均为56 k Da,表达量占细胞总蛋白的26%,表达水平为1.0 g/L发酵液;Western blotting、ELISA活性检测及小鼠免疫接种效力试验ED_(50)结果表明,此重组汉逊酵母戊型肝炎病毒样颗粒具有良好的抗原性和免疫原性,可用于制造戊型肝炎新型基因工程疫苗。 相似文献
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用免疫浊度法对进食期5~9月的鲤鱼Cyprinus carpio、鲫鱼Carassius auratus、鲶鱼Silurus asotus、中华大蟾蜍Bufo bufo gargarizans和中华鳖Pelodiscus sinensis血清中AT和PLG进行测定.结果显示:1)鲶鱼和中华鳖血清中AT的相对含量极显著高于鲤鱼、鲫鱼、蟾蜍的AT相对含量(P<0.01);2)中华鳖血清中PLG的相对含量显著高于鲤鱼、鲫鱼、鲶鱼和蟾蜍的PLG相对含量(P<0.01).结论:1)5种动物体内郁存在AT和PLG,并且抗原性和人的AT-Ⅲ和PLG相似;2)脊椎动物体内AT和PLG的生理含量与生存环境之间有一定的相关性. 相似文献
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