建兰花叶病毒单克隆抗体的制备及检测应用

用建兰花叶病毒(Cymbidium mosaic virus,CymMV)免疫的BALB/C鼠脾细胞与SP2/0鼠骨髓瘤细胞融合,经筛选克隆,获得3株能稳定传代并分泌抗CymMV单克隆抗体(McAb)的杂交瘤细胞(2C6、5B7和12G9),分别制备它们的单抗腹水。其中5B7和12G92株单克隆抗体腹水间接ELISA效价达10-6,3株单抗的抗体类型及亚类均为IgG1,轻链均为κ链。利用单克隆抗体建立了抗原包被间接ELISA(ACP-ELISA)检测CymMV的方法。蝴蝶兰病叶作1∶10240倍稀释、提纯CymMV病毒浓度为4.87ng/mL(每孔的病毒绝对量为0.487ng)时,该方法仍能检测到病毒。利用ACP-ELISA方法检测了田间样品,发现CymMV在兰花上发病很普遍。     

蚕豆萎蔫病毒单克隆抗体制备及检测应用

:用蚕豆萎蔫病毒(BBWV)免疫的BALB/C鼠脾细胞与SP2/0鼠骨髓瘤细胞融合,经筛选克隆,获得6株能稳定传代并分泌抗BBWV单克隆抗体(Mab)的杂交瘤细胞株,单抗腹水ELISA滴度为1:320000～1:640000,各单抗抗体类型均为IgG1。6株单抗与BBWV不同分离物均有反应,而与其它植物病毒无交叉反应。经Westernblot印迹分析表明,此6株单克隆抗体均是针对BBWV447kD的外壳蛋白大亚基的特异性抗体。这是国内外首次报道获得BBWV单克隆抗体     

芜菁花叶病毒单克隆抗体的制备及检测应用

先以芜菁花叶病毒（TuMV）免疫BAL B/C小鼠,然后取其脾细胞使之与SP2/0鼠骨髓瘤细胞融合,经筛选、克隆,获得4株能稳定传代并分泌抗TuMV单克隆抗体（Mab）的杂交瘤细胞,并以之制备腹水单抗。4株单克隆抗体腹水ELISA效价在10-5～10-6之间,仅对TuMV起特异性反应。Western blot分析表明,4株单抗都能与TuMV 34kD的外壳蛋白亚基起特异反应。利用TuMV的多抗兔血清和单抗腹水建立了三抗体夹心ELISA检测TuMV的方法,检测病叶的灵敏度为1∶5120倍,检测提纯TuMV病毒绝对量为21.9 ng。利用三抗体夹心ELISA测定出7种作物上有TuMV侵染。      

烟草曲茎病毒卫星DNA在不同寄主中的分子变异比较

近年来对一些单组分菜豆金色花叶病毒属病毒(begomoviruses)的研究发现,这类单组分begomoviruses伴随着一种新型卫星分子-DNAβ。对我国云南省发生的双生病毒的研究表明,云南begomoviruses普遍伴随DNAβ分子,DNAβ分子与致病性紧密相关,且begomoviruses与其伴随的卫星DNA的是共进化的。为了弄清卫星DNAβ是否存在类似于卫星RNA的高度变异,将烟草曲茎病毒(Tobacco curly shoot virus,TbCSV)及其伴随卫星DNAβ的侵染性克隆共同接种本氏烟(Nicotiana benthamiana)和心叶烟(N．glutinosa),对TbCSV卫星DNAβ在不同寄主中的分子变异进行了比较。     

单抗免疫斑点法和组织印迹法检测侵染蝴蝶兰的建兰花叶病毒

应用抗建兰花叶病毒(CymMV)的单克隆抗体, 建立了快速检测蝴蝶兰病样的免疫斑点法(Dot-ELISA)和组织印迹法(Tissue blot-ELISA)。CymMV单抗稀释8000倍时, Dot-ELISA可检出病毒粗汁液的最大稀释度为1:10240; Tissue blot-ELISA中样品1次平切后1~5次印迹与Dot-ELISA样品1:80稀释结果相当, 6~8次印迹与Dot-ELISA 1:320稀释结果相当, 前8次印迹均可以得到满意的检测效果。Tissue blot-ELISA的灵敏度略低     

单抗免疫斑点法和组织印迹法检测百合无症病毒*

应用抗百合无症病毒(Lilysymptomlessvirus,LSV)的单克隆抗体,建立了快速检测田间样品的免疫斑点法(Dot-ELISA)和组织印迹法(Tissueblot-ELISA)体系。LSV单抗稀释2,000倍时,Dot-ELISA中病叶粗汁液可被检出的最大稀释度为1∶640。Tissueblot-ELISA中样品一次平切后第1次印迹与Dot-ELISA样品1∶40稀释的结果相当,前4次印迹均可获得满意的显色效果。常规Tissueblot-ELISA的灵敏度低于Dot-ELISA,     

烟草曲茎病毒Y128分离物及伴随卫星的分子鉴定

从云南保山田问表现曲叶症状的烟草植株上分离到病毒分离物Y128,病株在实验室可经烟粉虱（Bemisia tabaci）传播到健康烟草上。分别用针对烟草曲茎病毒（TbCSV）、云南烟草曲叶病毒（TLCYNV）、中国番茄黄化曲叶病毒（TYLCCNV）及泰国番茄黄化曲叶病毒（TYLCTHV）等田间常复合侵染的云南粉虱传双生病毒的特异性引物对Y128 DNA-A进行PCR扩增,结果表明Y128是烟草曲茎病毒（TbCSV）的1个分离物。利用DNAβ的特异性引物1301和1302,在Y128中扩增到卫星DNA分子（Y128β）。对Y128进行DNAβ全序列测定及分析表明,Y128β拿长1350个核苷酸,其互补链上编码1个有功能的ORF（βC1）。Y128β的全序列与TbCSV各个分离物的卫星分子（Y2β、Y35β和Y115β）的同源性最高,分别为85．2％、94．3％和88％;与其它已报道的卫星DNAβ的同源性均低于56．1％。     

芜菁花叶病毒外壳蛋白在寄主植物叶绿体中的积累及其对光系统Ⅱ活性的影响

分别以接种感染芜菁花叶病毒(TuMV)和健康时照的青菜苏州青品种(Brassica chinensis L. cv.Suzhou)和芥菜温州芥菜品种(B.juncea L.cv.Wenzhou)叶片为材料提取完整叶绿体,用胰蛋白酶消除其表面蛋白后,抽提总蛋白,经SDS-PAGE电泳和Weste rn blot检测,发现TuMV的外壳蛋白(CP)存在于感病寄主的叶绿体中.免疫金标记电镜实验显示TuMV-CP定位在感病青菜和芥菜的细胞质和叶绿体中.对两种寄主植物叶片的叶绿素荧光动力学参数测定结果显示,青菜、芥菜的Fv/F.、Fv/Fm、φPSII、qp值都有不同程度的降低,qN值增大.实验结果表明TuMV侵染后在寄主细胞叶绿体中积累的CP,抑制了光系统Ⅱ (PS Ⅱ)的光化学活性,这可能是影响寄主植物光合作用的一个重要原因.     

百合无症病毒单克隆抗体的制备及检测应用

用百合无症病毒(Lilysymptomlessvirus,LSV)免疫的BALBC鼠脾细胞与SP20鼠骨髓瘤细胞融合,经筛选克隆,获得4株能稳定传代并分泌抗LSV单克隆抗体(MAb)的杂交瘤细胞(2A2、5H9、5H2和5E12),并分别制备它们的单抗腹水。4株单克隆抗体腹水间接ELISA效价达10-6,5H9和5E12的抗体类型及亚类均为IgG1,而2A2和5H2均为IgG3,4株单克隆抗体的轻链均为κ链。利用单克隆抗体建立了抗原包被间接ELISA(ACP-ELISA)检测LSV的方法。病叶作1300倍稀释、提纯LSV病毒浓度为18ngmL(每孔的病毒绝对量为1.8ng)时,该方法仍能检测到病毒。利用ACP-ELISA检测了田间样品,发现LSV在百合上发病很普遍。