兰科植物microRNA的研究进展

microRNA (miRNA)是一类广泛存在的非编码小分子RNA,在植物的生长发育和应激反应等过程中起到重要的调控作用.本文从miRNA在植物中的作用机制出发,对近10年来兰科植物各属miRNA的鉴定、几类miRNA的具体功能及miRNA的其他相关技术研究进行综述,以期为兰科植物小分子RNA的功能作用及调控网络解析提...     

基于AAVS1位点构建稳定表达Cas9蛋白的非小细胞肺癌细胞系

该研究旨在利用CRISPR/Cas9介导的同源重组技术将Cas9基因序列整合入非小细胞肺癌A549细胞基因组中的AAVS1位点,建立稳定表达Cas9蛋白的A549单克隆细胞系。该技术避免了Cas9基因随机整合进入基因组带来的潜在风险。通过PCR、Western blot、CCK-8、STR技术分别检测A549单克隆细胞系的插入位点、Cas9蛋白水平、细胞增殖能力、基因编辑能力以及细胞身份信息。上述结果显示,在单克隆细胞系A549 Cas9-copGFP-1中Cas9基因准确插入至AAVS1安全位点并高表达Cas9蛋白,细胞增殖能力未发生改变。此外,该细胞还具有良好的基因编辑能力,细胞身份信息准确无误。总之, A549 Cas9-copGFP-1细胞可用于进一步的基因编辑,为肺癌相关基因的高通量筛选和功能性研究提供一种有力工具。     

人乳头状瘤病毒DNA检测在宫颈病变筛查中的应用研究

目的：探讨高危型人乳头状瘤病毒（HR-HPV）DNA检测方法在宫颈病变筛查中的应用意义。方法：580例妇女同时进行薄层液基细胞学（TCT）、第2代杂交捕获法（HC Ⅱ）和阴道镜下宫颈组织活检,并以病理组织学检查结果作为确诊标准进行对比分析。结果：①580例受检者中病理诊断为炎症207例（35.69%）,CIN Ⅰ 224例（38.62%）,CIN Ⅱ 96例（16.55%）,CIN Ⅲ 38例（6.55%）,浸润癌15例（2.58%）;②TCT检测异常者中炎症52例（25.12%）,CIN Ⅰ 177例（79.02%）,CIN Ⅱ 85例（88.54%）,CIN Ⅲ36例（94.74%）,浸润癌15例（100%）,其中CIN Ⅱ和CIN Ⅲ组间差异无统计学意义（P〉0.05）,但显著高于炎症组和CIN Ⅰ组,低于湿润癌组（P〈0.01或0.05）;③HPV DNA检测阳性者中炎症66例（31.88%）,CIN Ⅰ 152例（67.86%）,CIN Ⅱ 83例（86.46%）,CINIII 35例（92.11%）,浸润癌组15例（100%）,除CIN Ⅱ和CIN Ⅲ组间差异无显著性外（P〉0.05）,其余各组间差异均有统计学意义（P〈0.05或0.01）,且HPV-DNA检测阳性组CIN和浸润癌发病率明显高于阴性组（P〈0.01）;④30岁以下高危险型HPV感染率（65.53%）显著高于30岁以上34.47%感染率（P〈0.01）;⑤联合应用TCT、HPV-DNA检测诊断宫颈癌及癌前病变的敏感度和特异度分别为96.14%和69.28%,高于TCT或HPV-DNA的单独检测。结论：宫颈高危险型HPV感染是CIN及宫颈癌的主要发病因素,并与病变严重程度密切相关,而HPV-DNA和TCT联合应用可提高宫颈癌及癌前病变的检出率。     

基于高覆盖(磷酸化)蛋白质组对人胚胎干细胞干性维持调控网络的解析

目的:对人胚胎干细胞H9的(磷酸化)蛋白质组进行鉴定和深入分析,探讨维持人胚胎干细胞干性的核心调控网络。方法:利用新近发表的TAFT磷酸化肽段富集策略和高精度质谱鉴定技术,采用无标定量方法对H9细胞(磷酸化)蛋白进行定量分析;结合MOTIFX、iGPS、IPA等多种生物信息学分析软件,分析H9细胞的磷酸化基序-激酶、转录因子-靶基因调控网络。结果:获得了目前高度覆盖的H9细胞(磷酸化)蛋白质组数据集,鉴定到8674种蛋白质,其中3898种能够发生磷酸化修饰,包括13 676条磷酸化肽段,高可信度(class 1)磷酸化位点有11 870种。与已有的H9细胞磷酸化蛋白质组数据相比,其中2247种磷酸化蛋白质和10 025种磷酸化位点是本研究新鉴定到的。基于基序和激酶预测分析,推导出与干性维持相关的已知转录调节因子的新的磷酸化修饰基序以及调控其发生磷酸化的激酶。结合多能性转录因子对靶基因的调控信息,构建了多能性调控分子磷酸化修饰及其转录调控的核心网络。此外,还对特定位点的磷酸化修饰水平及其对应蛋白的总体丰度水平进行了比较及功能分析。基于各自的百分位数,比较磷酸化修饰水平与其对应蛋白的总体丰度,发现具有高丰度但低磷酸化修饰水平的蛋白倾向于参与物质转换或物质运输等生物过程,而低丰度但高磷酸化水平的蛋白质倾向于参与信息转导或调控过程。结论:提供了人胚胎干细胞H9高覆盖的(磷酸化)蛋白质组数据,这些数据有助于深入了解蛋白质磷酸化修饰在胚胎干细胞干性维持中所发挥的重要作用,为胚胎干细胞基础和应用研究提供了宝贵的数据资源。     

春兰miR396过表达对拟南芥叶片生长、光合及叶绿素荧光特性的影响

为研究春兰miR396(cgo-miR396)基因在植物叶片生长发育中的作用,针对春兰的栽培和生产提供新的研究思路.将该基因前体cgo-MIR396在拟南芥中过量表达,观察其形态指标的变化并对相应的光合和叶绿素荧光参数进行测定.春兰miR396基因在花期叶片中的表达量最高,过表达该基因可以显著增加拟南芥的叶长、叶宽、叶...     

人乳头状瘤病毒DNA 检测在宫颈病变筛查中的应用研究

目的:探讨高危型人乳头状瘤病毒(HR-HPV)DNA检测方法在宫颈病变筛查中的应用意义。方法:580例妇女同时进行薄层液基细胞学(TCT)、第2代杂交捕获法(HC Ⅱ)和阴道镜下宫颈组织活检,并以病理组织学检查结果作为确诊标准进行对比分析。结果:①580例受检者中病理诊断为炎症207例(35.69%),CIN Ⅰ 224例(38.62%),CIN Ⅱ 96例(16.55%),CIN Ⅲ 38例(6.55%),浸润癌15例(2.58%);②TCT检测异常者中炎症52例(25.12%),CIN Ⅰ 177例(79.02%),CIN Ⅱ 85例(88.54%),CIN Ⅲ36例(94.74%),浸润癌15例(100%),其中CIN Ⅱ和CIN Ⅲ组间差异无统计学意义(P>0.05),但显著高于炎症组和CIN Ⅰ组,低于湿润癌组(P<0.01或0.05);③HPV DNA检测阳性者中炎症66例(31.88%),CIN Ⅰ 152例(67.86%),CIN Ⅱ 83例(86.46%),CINIII 35例(92.11%),浸润癌组15例(100%),除CIN Ⅱ和CIN Ⅲ组间差异无显著性外(P>0.05),其余各组间差异均有统计学意义(P<0.05或0.01),且HPV-DNA检测阳性组CIN和浸润癌发病率明显高于阴性组(P<0.01);④30岁以下高危险型HPV感染率(65.53%)显著高于30岁以上34.47%感染率(P<0.01);⑤联合应用TCT、HPV-DNA检测诊断宫颈癌及癌前病变的敏感度和特异度分别为96.14%和69.28%,高于TCT或HPV-DNA的单独检测。结论:宫颈高危险型HPV感染是CIN及宫颈癌的主要发病因素,并与病变严重程度密切相关,而HPV-DNA和TCT联合应用可提高宫颈癌及癌前病变的检出率。     

子宫肌瘤患者VEGF、ER及PR的表达及相关性

目的:研究血管内皮生长因(VEGF)、雌激素受体(ER)、孕激素受体(PR)在子宫肌瘤组织中的表达及其相关性,探计三者在子宫肌瘤发生发展中的作用.方法:采用免疫组化sP法检测40例肌瘤组织及其附近正常平滑肌组织中VEGF、ER及PR的表达水平.同时采用Western-blot法检测其中VEGF的含量,结果:①经免疫组化检测,VEGF、ER及PR在子宫肌瘤组织中表达阳性率均高于相应的瘤旁组织,差异具有显著性(P＜0.05).②VEGF的表达与ER及PR成正相关.③经Western-blot检测,VEGF蛋白含量在子宫肌瘤组织中显著高于相应的瘤旁组织,差异具有显著性(P＜0.05).结论:雌孕激素及VEGF均参与了子宫肌瘤的发生发展.三者之间可能具有协同作用.     

一氧化氮诱导食管癌细胞线粒体DNA编码基因过表达

以人食管癌细胞系EC109作为驱赶方（driver）,以被一氧化氮（nitric oxid,NO）诱导的EC109作为实验方（tester）,应用抑制消减杂交(suppression subtractive hybridization, SSH)、反向mRNA斑点印迹和RNA印迹等技术手段研究了NO诱导的食管癌细胞中基因的过表达情况.然后对过表达基因的表达序列标签（expressed sequence tag,EST）实施序列测定,并与GenBank进行BLAST同源性比较和序列突变分析.结果先后两次从69个SSH阳性克隆中共鉴定出6个线粒体DNA（mitochondrial DNA, mtDNA）编码的基因,即ND-4L、ND-4、COX-2、Lys-tRNA、ATP-8和ATP-6.表明NO可以诱导食管癌细胞mtDNA编码的基因过表达.另外,在ND-4L/ND-4基因的片段（10 736～11 449）上发现了三处同型单核苷酸置换（10 872 T→C, 11 001 A→G, 11 346 A→G）,在COX-2/Lys-tRNA/ATP-8/ATP-6基因片段（8 011～8 589）上发现了一处单核苷酸缺失（8 380 A）.氨基酸序列分析表明,在NO诱导的EC109中可能存在着一种结构异常的ATP-8肽链（一条在N端被截短的只有11个氨基酸残基的肽链,而正常的ATP-8肽链为68个氨基酸残基）.这些研究结果为深入揭示NO对肿瘤细胞的作用机制提供了新的重要线索.     

保妇康栓联合LEEP治疗宫颈糜烂的疗效观察

目的:探讨LEEP联合保妇康栓治疗宫颈糜烂的临床疗效.方法:106例宫颈糜烂患者随机分为对照组(51例)与治疗组(55例),其中对照组采用LEEP治疗,治疗组采用LEEP联合保妇康检治疗.观察比较两组疗效、阴道排液、术后出血和创面愈合情况.结果:治疗组阴道排液量、术后出血时间、出血例数及创面愈合时间与对照组比较差异均有统计学意义(P＜O.05或P＜0.01);治疗组总有效率与对照组无差异(P＞0.05),但92.7%的治愈率显著高于对照组78.4%的治愈率,差异具有统计学意义(P＜0.05).结论:LEEP联合保妇康栓治疗宫颈糜烂疗效显著,优于单独LEEP治疗.     

利用酵母双杂系统筛选与春兰CgSEP1相互作用的蛋白

兰花形态优雅,花香馥郁,花形奇特,具有高度特化的花器官,观赏价值较高。有关兰花花器官形成分子机理以及基因组测序正在不断研究中。为了探讨兰花基因间相互作用情况,本研究以春兰为材料进行基因克隆,获得了18个花发育相关基因的编码序列,经测序鉴定分别属于ABCDE类MADS-box家族基因。再以其中春兰AP/AGL9组的CgSEP1为诱饵蛋白,亚克隆至pGBKT7质粒,构建诱饵载体,将18个蛋白编码亚克隆至pGADT7质粒。通过酵母双杂系统筛选到了3个与其互作的蛋白:pGADT7-AG1、p GADT7-SEP2、pGADT7-AGL6-3。结果表明,C类AG-like和E类SEP-like、AGL-like家族基因参与SEP1基因春兰花发育过程,并形成多种蛋白混合物,共同调控花瓣和萼片的形成,进一步揭示了春兰的成花机理。