鸡髓样分化因子88的原核表达及单克隆抗体制备

目的:克隆、表达、纯化鸡髓样分化因子88(MyD88),制备其单克隆抗体。方法:从脾脏cDNA中扩增857bp的MyD88基因片段,插入pMAL-c5X表达载体,转化大肠杆菌BL21(DE3)获得表达菌株,IPTG诱导表达,用SDS-PAGE分析MBP(麦芽糖结合蛋白)-MyD88重组融合蛋白的表达,切胶纯化目的蛋白;免疫BALB/c小鼠,制备针对MyD88的单克隆抗体,Western印迹检测抗体特异性,制备腹水并进行抗体亚型鉴定和效价测定。结果:构建了鸡MyD88原核表达载体pMAL-MyD88,并在大肠杆菌中获得高表达,目的蛋白以可溶性和包涵体两种形式存在;建立了3株抗鸡MyD88单克隆抗体细胞株,制备了腹水,亚型分别为IgG1、IgG1和IgG2a,轻链均为κ,腹水抗体的效价均为1∶2×105。结论:在原核表达系统中表达、纯化了重组鸡MyD88,制备了针对鸡MyD88的单克隆抗体,为后续的MyD88定量和功能研究奠定了基础。     

鸡A-FABP基因多态性分析及其与脂肪性状的

以北京油鸡为试验材料,对A-FABP基因进行单核苷酸多态性(SNPs)检测和基因型与性状的关联分析。方差分析结果表明,不同基因型间腹脂率、皮脂厚、肌内脂肪含量差异极显著(P<0.01),体重在不同基因型间差异不显著(P >0.05)。由此推测,A-FABP可能为影响鸡脂肪代谢的主效基因或与主效基因相连锁。     

鸡肉肌苷酸和肌内脂肪等肉品风味性状遗传参数的估计

对鸡肉肌苷酸（Inosine-5¢-Monophosphate,IMP）和肌内脂肪（Intramuscular fat,IMF）等重要肉品风味性状的遗传参数进行了估计,旨在从遗传理论上为确定鸡肉风味品质性状的选育方法提供依据。采用MTDFREML方法对1069只90日龄北京油鸡公鸡的相关性状的遗传力和遗传相关进行了估计,结果表明,胸肌IMP和IMF含量属中等偏低遗传力性状（h2=0.23,0.10）,腹脂重(AFW)、胸肌重(BMY)、胸肌率(BMR)、腿肌重(LMY)、体重(BW)、鸡冠重(CW)和鸡冠率(CWP)的遗传力较高（h2=0.56～0.79）,腹脂率(AFP)、腿肌率(LMR)、睾丸重(TW)和睾丸率(TWP)等性状的遗传力分别为0.24、0.32、0.39和0.35。IMP与胸肌率、腿肌率和尾脂厚呈较低度的表型正相关,与其他性状无明显表型相关;IMF与体重、腹脂率、尾脂厚和脂带宽呈一定程度的表型正相关（rP=0.11～0.33）。IMP与体重和鸡冠率呈中等以上程度的遗传负相关（rA=-0.38,-0.62）,与胸肌率呈较高水平的遗传正相关（rA=0.57）;IMF与体重和腹脂重则呈高度遗传正相关（rA=0.7 5,0.66）,与腹脂率和鸡冠率呈中等水平遗传正相关（rA=0.32,0.40）;IMP与IMF之间呈中低水平的遗传正相关（rA =0.27）。据此推断,可以利用家系法对IMP和IMF含量进行选择提高。     

鸡MyD88-TIR的同源模建

髓样分化因子(MyD88)是Toll受体(TLR)信号通路中的一个关键接头分子,在传递信息和介导炎症反应中具有重要的作用。对鸡MyD88(Myeloid differentiation primary response protein MyD88)的TIR(Toll-interleukin1-resistance)区域进行同源建模,并评估其可用性,为进一步研究MyD88与TLR(Toll receptor)相互作用的原理奠定基础。通过结构域分析、模板相似性搜索和序列比对、初始建模、精修和动力学优化,立体化学结构和能量合理性评估,获得未知三维结构的鸡MyD88-TIR三维模型。结果表明,鸡MyD88包含DEATH和TIR两个结构域,所模拟的MyD88-TIR三维模型二面角构象和氨基酸能量分布以及主侧链立体化学特性合理。