产生抗北京鸭红血球单克隆抗体的杂交瘤细胞系的建立(简报)

自Khler和Milstein成功地建立了杂交细胞瘤技术以来,不仅在免疫学,而且在生物学、医学以及其它许多领域中,都已得到广泛、深入的应用。我们自1980年起建立这项技术,目前已成功地获得了单克隆化的抗北京鸭红血球的杂交瘤细胞系,这些细胞能在体外培养过程中稳定地分泌单克隆抗体,现将主要结果简报于下。     

连续分泌抗北京鸭红血球单克隆抗体的淋巴细胞杂交瘤CBH-1

以北京鸭红血球为抗原免疫Balb/cJ小鼠,三天后取脾细胞与小鼠NS-1骨髓瘤细胞在PEG作用下,用两种方法进行细胞融合。只有淋巴细胞杂交瘤细胞能在一种选择性培液——HAT液中生长,具有分泌抗体活性的杂交瘤细胞,借助其上清液的斑点试验加以选择。对斑点试验阳性的杂交瘤细胞进行克隆化和扩大培养,得到能专一分泌抗北京鸭红血球单克隆抗体的淋巴细胞杂交瘤,定名为CBH-1。在体外经过69代培养,历时十月余,分泌能力仍未见衰减。体内可传4—5代,腹水中可检出大量分泌抗体。用降植烷、Arlacel A和石蜡油诱发动物的腹水,其量以降植烷最高、石蜡油次之。使用国产石蜡油作为诱发腹水试验似具有一定实用价值。加5γ转铁蛋白至每毫升不含牛血清的DMEM液中,在15天的培养期内,结果至少与加20%小牛血清的培液的结果相似。首次克隆化后的CBH-1细胞中,空斑形成细胞达97.5%,再次克隆化的细胞中,空斑形成细胞达99.8%,证明是均一的细胞群落。本文还就杂交瘤制备过程及细胞稳定性问题进行了讨论。     

连续分泌抗北京鸭IgM单克隆抗体的淋巴细胞杂交瘤CBH-2

以北京鸭Ig为抗原免疫Balb/cJ小鼠三次,末次免疫三天后取脾细胞与小鼠NS-1骨髓瘤细胞融合,隔天换入1/2体积含有2倍HAT的完全DMEM选择培养液,借助酶联免疫吸附试验检测上清液。测得阳性的一株杂交瘤细胞经十二次克隆化培养被定名为CBH-2。在体外培养历时10月余,其分泌能力仍未见衰减。体内传至第八代,腹水中检出的分泌抗体强度比体外培养的上清液高8000倍。纯化得到的单克隆抗体经免疫双扩散分析证明该单克隆抗体属鼠1gG_1亚型。以经Sephadex G-200分离得到的北京鸭IgM作为包被抗原,酶标法测得的O.D值较高,而以北京鸭IgM经巯基乙醇断链后的蛋白或以DEAE-52柱分离得到的IgG作为包被抗原测得的O.D值较低。同时,以北京鸭Ig经Protein A-Se-pharose CL4B柱五次吸附后的流出蛋白包被,测得的O.D值也较低。由此可见CBH-2细胞产生的单克隆抗体专一性是抗北京鸭IgM。CBH-2细胞分泌的单克隆抗体与北京鸭Ig的免疫扩散未见沉淀线。用Balb/cJ、C_(57)BL/6J和ICR/JCL小鼠的腹腔渗出细胞作为克隆化的饲养细胞能达到相似效果。而以Wistar大鼠的腹腔渗出细胞作为饲养细胞效果较差,使用胸腺细胞时杂交瘤细胞则几乎不能生长。     

抗 P 物质单克隆抗体的特性研究

观察了细胞株(BTP-1)所分泌的抗 P 物质单克隆抗体与17种 P 物质类似物的交叉反应。该单克隆抗体所针对的是 P 物质的羧基末端,与羧基端的甲硫氨酸残基有较大的关系,而和P 物质类似物的拮抗作用的强弱无相关性。与9种小肽(亮氨酸脑啡肽、甲硫氨酸脑啡肽,内啡肽、皮啡肽、血管紧张素Ⅰ、Ⅱ、缓激肽,催产素、胰高血糖素)均无交叉反应,显示该单克隆抗体有较好的特异性。经免疫组织化学试验,中脑以下部位的脊髓后角Ⅱ层、黑质、三叉神经脊束核、脚间核等末梢纤维和第Ⅱ脑室腹侧灰质、被盖外侧核、中缝核等胞体核周质染成棕色。BTP-1属于大鼠 IgG 型单克隆抗体。描述了微载体大量培养杂交瘤和制备单克隆抗体的技术,并讨论了大量制备的可能性。     

分泌抗北京鸭免疫球蛋白单克隆抗体的淋巴细胞杂交瘤CBH-2(简报)

淋巴细胞杂交瘤技术作为一种新的生物工程技术,已在生物学和医学领域内得到广泛的应用。我们继建立产生抗北京鸭红细胞单克隆抗体的杂交瘤细胞系CBH-1后,又建立了一株产生抗北京鸭免疫球蛋白(I_g)单克隆抗体的杂交瘤细胞系,命名为CBH-2。这种杂交瘤细胞经体外培养,能稳定地分泌抗北京鸭I_g的单克隆抗体。此单克隆抗体在以北京鸭抗体进行放射免疫和酶标等测定时,可用作第二抗体。现将主要结果简报于下。北京鸭I_g抗原的制备及免疫:从北京鸭颈动脉采血,分离血清,用50%和33%硫酸铵沉淀法提取二次。每只Balb/cJ小鼠腹腔免疫剂量为0.3毫克,共免疫三