β-溶血性链球菌的苏氨酸基因在大肠杆菌中的无性繁殖和表达

用限制性内切酶BamHI分别酶解β-溶血性链球菌染色体DNA和pBR322质粒DNA,经T4DNA连接酶连接后转化到受体菌大肠杆菌C600,采用插入钝化法筛选含β-溶血性链球菌DNA片段的Ap~rTc~s无性繁殖系,然后利用受体细胞从营养缺陷型转变为原养型的遗传学功能互补选择方法筛选到含苏氨酸基因的57-5号菌。对57-5号菌进行营养标记和抗药性标记测定,证实它带有苏氨酸基因。通过琼脂糖凝胶电泳分析和电子显微镜观察进一步证实57-5号菌所含的杂种质粒pFD201 DNA是由β-溶血性链球菌DNA和pBR322 DNA重组而成。     

质粒RP4的一株杀宿主温度敏感突变体的研究

质粒是细菌染色体外的遗传因子。一般来说质粒的存在与否并不影响宿主细胞的正常生长。但是当宿主细胞存在某些缺陷时,质粒所带的某些基因可以代替宿主缺陷基因的功能,这一点很早就为F′的遗传学分析所说明。与此相反,已有一些报道表明,某些基因发生了突变的质粒,或者通过重组DNA技术所形成的某些杂种质粒(例如带生长激素释放抑制因子基因的杂种质粒PSOM 11-3),可以严重影响宿主细胞的生长,甚至杀死宿主细胞。因此质粒基因与宿主基因的相互关系的研究,不仅有助于进一步弄清原核生物基因的调控机制,也可以借此深入了解某些突变质粒或杂种质粒对宿主产生有害影响的原因。这在遗传工程上也是有一定价值的。     

用改良的酸酚法制备高纯度质粒DNA

制备纯净的具有生物学活性的质粒DNA 是基因工程研究中一个重要基础。     

β-溶血性链球菌的高分子DNA的提取和纯化

我们用Leblan。等^[2]的方法和其他一般的 溶菌方法^[1,3,5],都未能在提取户溶血性链球菌 DNA方面取得满意的结果,因此,采用了一种 液氮冻融法,所用的溶菌酶和SDS¹⁾浓度都比常 用者为高,能使链球菌DNA得到释放。但是制 备物中还含有大量小分子DNA,进一步通过制 备电泳以及电泳洗脱纯化,最后取得纯净的电 泳均一的高分子DNA,)