代谢工程改造L-半胱氨酸供给模块促地衣芽胞杆菌高效合成杆菌肽

杆菌肽是一种主要由芽胞杆菌产生的广谱性抗生素,目前作为兽药广泛应用于畜禽养殖领域.前体氨基酸供应不足可能是限制微生物发酵高产杆菌肽的重要因素.文中以杆菌肽工业生产菌株——地衣芽胞杆菌Bacillus licheniformis DW2为出发菌株,研究L-半胱氨酸供给模块强化对杆菌肽合成的影响.首先,构建了L-半胱氨酸合...     

硫矿硫化叶菌MTSase和MTHase基因的克隆与表达

从嗜热硫矿硫化叶菌(Sulfolobussolfataricus)ATCC35092的基因组中用PCR方法扩增得到编码MTSase和MTSase的基因,分别将其插入原核表达载体pTrc99a中,并转入大肠杆菌BL21(DE3),进行诱导表达。MTSase和MTHase酶活产率达到了31.3U/g(wetcell)和403U/g(wetcell)。在75℃,pH5.0条件下,两酶联合作用转化淀粉生产海藻糖,当淀粉浓度为15%,DE值为10时,海藻糖转化率最高为53.6%。     

影响引入微生物根部定殖的因素

从外界引入的各类有益微生物如生防菌（ＢＣＡ）和根际促生菌或增产菌（ＰＧＰＲ,ＹＩＢ）到种子表面随其生根发芽而蔓延或直接到根表沿根分布定殖。外来微生物在根际定殖的过程为与根尖接触,沿根分布,最后在根际建立自己的种群。定殖的位点以ＰＧＰＲ为例,是表皮细胞间隙,或侧根、根毛基部。外来微生物在根际定殖动态变化的原因,由于根际生物的和非生物的因素引起的。生物因子除去外来微生物本身的生理特性,还有根际土著微生     

BIOLOG系统鉴定黄瓜根围促生菌的初步研究

对筛选出的８株具有明显促生防病作用的黄瓜根围促生菌ＣＮ１１,ＣＮ３１,ＣＮ４５,ＣＮ１ １６,ＣＮ１２９,ＸＢ１２０,ＸＢ５,ＸＢ４１通过ＢＩＯＬＯＧ法进行了分类鉴定,分别为：铜绿假单胞菌（Ｐｓｅｎｄｏｍｏｎａｓ ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ）,波纹假单胞菌（Ｐ． Ｃｏｒｒｕｇａｔａ）,短芽孢杆菌（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｂｒｅｖｉｓ）,荧光假单胞菌Ｂ型（Ｐ． Ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｓ ｔｙｐｅ Ｂ）,铜绿假单胞菌（Ｐ． Ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ）,荧光假     

黄瓜苗根围拮抗细菌X3的分子鉴定

采用生理生化、Biolog和16S rDNA分子鉴定3种不同方法,对抑制黄瓜苗期猝倒病病原真菌的细菌菌株X3进行了鉴定．生理生化鉴定显示该菌株为Pseudomonas aeruginosa;而Biolog鉴定显示其为P．spinosa;进一步对该菌株作16S rDNA基因的测定与分析,表明其与已报道的P．aeruginosa 16S rDNA具有93．7％的同源性,二者在所建系统发育树中处于同一分枝,据此确定该菌株为P．aeruginosa。     

基因沉默与生物进化

基因沉默主要发生在转录水平和转录后水平,它是生物体抵御外来核酸片段入侵、保护基因组完整性并调控基因表达的一种重要机制。以RNA为媒介,以甲基化和特定RNA降解为手段的基因沉默普遍存在于生物界中,暗示其在生物进化过程中可能扮演了重要的角色。文章最后探讨了在基因沉默与生物进化关系研究中可能面临的一些问题。     

运用生色基因标记黄瓜根围促生菌(PGPR)筛选菌株

采用三亲交配方法 ,通过Tn7转座系统将lacZY标记基因导入黄瓜根围促生菌 (PG PR)筛选菌株PseudomonasfluorescensCN1 1 6和PseudomonascorrugataCN31的利福平抗性突变株中 ;标记假单胞菌菌株则被赋予了利用乳糖作为唯一碳源的能力 ,在只有乳糖的M9培养基上生长能分解X Gal,菌落显出特有的蓝色 ;经Southern杂交分析 ,证明标记基因lacZY存在于转化菌株的染色体上 ;经验证标记菌株标记性状稳定 ,与对应的野生菌株比较其它性状如培养性状、形态特征、生防效果等基本不变 ;PGPR菌株利福平抗性和生色基因标记的结合 (双标记 )能最大限度地将土壤中引入的PGPR菌株与土著细菌分开 ,检测下限可达 1 0CFU mL ,为PGPR在根围的分子生态学研究提供了一个较好的工具。     

立枯丝核菌可溶性蛋白图谱研究II．用等电聚焦电泳比较各融合群及亚群

利用薄层(0.5mm)聚丙烯酰胺凝胶等电聚焦电泳对于pH3．5一10.0范围内立枯丝核菌(Rhizoctonia solani)AG-1～AG-5;各融合群及亚群共45个参试菌株的菌体可溶性蛋白进行了比较分析。参试菌株分别来自于日本、美国及国内鉴定的菌株。电泳结果表明：不同融合群或亚群的蛋白质图谱表现显著差异。AG-3、AG-4、AG-5各融合群和AG-IIA、IB、IC、AG-2-1、AG-2-2各亚群分别表现出各自的特征性图谱。以上结论与前篇(刘力、葛起新,1988)报道中的基本相符,且更为明确。针对试验结果,就可溶性蛋白等电聚焦电泳图谱与培养性状类型的比较以及不同菌培养时间对电泳结果的影响进行了分析讨论。     

一株毒死蜱降解细菌的分离鉴定及其在土壤修复中的应用

从蔬菜大棚土壤中分离到一株能以毒死蜱为唯一碳源和能源生长的菌株DSP3,该菌在含毒死蜱（100mg/L）的酵母膏和蛋白胨与同样毒死蜱含量而无酵母膏蛋白胨的无机盐培养基中,18d对毒死蜱的降解率分别为986%和762%;在土壤实验中20d对毒死蜱（100mg/kg）的降解率接近100%,加入DSP3菌在蔬菜大棚新鲜土壤中能有效促进毒死蜱在土壤中的降解。根据生理生化特征、16S rDNA序列分析、（G+C）mol%测定和DNA同源性分析,将菌株DSP3鉴定为粪产碱杆菌（Alcaligenes faecalis）。     

能量代谢工程促地衣芽胞杆菌DW2高效合成杆菌肽

杆菌肽是一种主要由芽胞杆菌产生的广谱性环肽类抗生素,目前广泛应用于兽药领域。能量代谢在微生物高效合成目的代谢产物中具有重要作用。文中以杆菌肽工业生产菌株地衣芽胞杆菌Bacillus licheniformis DW2为出发菌株,首先构建了呼吸链分支途径细胞色素bd泛醇氧化酶基因cydB缺失菌株,发现cydB缺失后杆菌肽效价和胞内ATP浓度相比于对照菌株分别提高了10.97%和22.96%。接着,证实了强化表达另外一条呼吸链分支途径——细胞色素aa3氧化酶基因qoxA能够提高杆菌肽合成水平,其杆菌肽效价和胞内ATP浓度相比于对照菌株分别提高了18.27%和34.00%。强化ADP合成供给也是促进胞内ATP积累的有效策略,结果表明强化表达腺苷激酶DcK和腺苷酸激酶AdK均可以提高杆菌肽效价和胞内ATP浓度,其中强化表达DcK效果较好,其杆菌肽效价相比对照提高16.78%。最后,通过组合代谢工程育种,在基因cydB缺失菌DW2ΔcydB基础上整合表达了qoxA和dck,得到工程菌株DW2-CQD(DW2ΔcydB::qoxA::dck),发酵结果表明,DW2-CQD杆菌肽效价达到954.25 U/mL,相比于对照菌株提高了21.66%,单位菌体杆菌肽效价为2.11 U/CFU,相比对照提高了11.05%。此外,DW2-CQD胞内ATP浓度为39.54 nmol/L,相比于对照提高了49.32%。结果证实能量代谢工程是提高杆菌肽发酵水平的有效策略,提供了一株具有工业化应用前景的杆菌肽生产菌株。