脂肪酸影响草鱼肝细胞脂质蓄积状态及诱导其凋亡的离体研究

为探究外源脂肪酸对草鱼肝细胞脂质代谢及健康状况的影响及其机理,体外培养草鱼肝细胞,并采用不同浓度（0-1 mmol/L）油酸（Oleic acid）进行细胞孵育,噻唑兰比色法（Methyl thiazolte trazoliu,MTT）和油红O染色提取法检测肝细胞活力及脂质蓄积状况,BODIBY和DAPI染色法观察肝细胞脂滴及细胞核情况,流式细胞术检测肝细胞凋亡率变化,Real-time qPCR检测脂质合成标志基因过氧化物酶体增殖物激活受体γ（Peroxidase proliferation activated receptor,PPARγ）和CCAAT/增强子结合蛋白α（CCAAT/enhancer binding protein alpha,C/EBPα）、凋亡相关基因Caspase家族等的表达情况。结果显示,随着油酸处理浓度的增加,肝细胞活力和细胞内脂质积累呈现先上升后下降的趋势,分别在0.4和0.6 mmol/L时达到最大值（P < 0.05）;肝细胞凋亡率则先下降后上升,在0.4 mmol/L油酸处理时最低,1 mmol/L油酸处理时最高（P < 0.05）;此外,0.4 mmol/L油酸处理抑制了肝细胞Caspase-3b和Caspase-9基因的表达,上调Bcl-2/Bax mRNA比值（P < 0.05）,而0.8 mmol/L油酸处理显著促进Caspase-3b、Caspase-8、Caspase-9及凋亡诱导因子（Apoptosis inducing factor,AIF）基因的表达,下调Bcl-2/Bax的mRNA比值（P < 0.05）。研究表明,一定浓度的脂肪酸可增强草鱼肝细胞活力,促进胞内脂质积累,抑制细胞凋亡,而脂肪酸浓度过高则抑制肝细胞活力并诱导肝细胞凋亡,其作用与脂肪酸影响脂质代谢及凋亡基因的表达有关。