一种高效无选择标记的黑曲霉基因组编辑方法

黑曲霉(Aspergillus niger)是一种重要的工业生产菌株,被广泛地应用于生产酶制剂和有机酸,但仍需要进行基因组改造提高它的应用潜力。CRISPR/Cas9技术是一种被广泛采用的黑曲霉基因组编辑技术,但由于需要在基因组中整合选择标记或基因编辑效率还有待提高,影响了其在工业菌株改造中的应用。本研究建立了一种基于CRISPR/Cas9技术的高效无选择标记的基因编辑方法。首先,利用5S rRNA启动子启动sgRNA的表达,构建了一个含有AMA1(autonomously maintained in Aspergillus)复制起始片段的sgRNA和Cas9共表达质粒;同时通过敲除kusA基因构建非同源末端连接(non-homologous end joining pathway,NHEJ)修复缺陷的高效同源重组菌株;最后利用含有AMA1片段质粒的不稳定性,通过无抗平板传代丢失含有sgRNA和Cas9共表达质粒。利用该方法,在采用同源臂长度仅为20bp的无选择标记供体DNA进行基因编辑时,基因编辑效率可达到100%。该方法为黑曲霉基因功能的研究和细胞工厂的构建奠定了基础。     

益生菌的应用现状和发展前景

益生菌,是一类被科学家证实为对人体和动物体有益的菌。目前,已被广泛运用于医药、食品、畜牧业等多个领域。益生菌的产品诞生于20世纪30年代,经历了将近一个世纪的发展后,在国外已形成一个完整的产业链和成熟的市场。但在我国,则处于一个刚起步的阶段。可能国内的人们对益生菌的产品有点陌生,但随着人们生活水平的提高和消费观念的转变,他们对食品的要求已不再单纯停留在解决温饱的问题上,而是更多地追求安全、健康和营养。相信只要加大对益生菌产品的宣传和消费引导,益生菌在国内亦将有一片广阔的发展前景。