反刍兽月形单胞菌β-木糖苷酶基因在毕赤酵母中的高效表达及酶学性质

β-木糖苷酶(β-xylosidase,酶编号EC 3.2.1.37)是木聚糖降解酶系中的重要组成部分。本研究以毕赤酵母Pichia pastoris GS115为宿主菌尝试表达反刍兽月形单胞菌Selenomonas ruminantium中的β-木糖苷酶基因Sxa。根据毕赤酵母对密码子的偏爱性、mRNA二级结构、GC含量和稀有密码子,对Sxa基因进行优化;通过基因合成技术获得了全长基因mSxa并构建重组酵母表达载体pPIC9K-mSxa;以BglⅡ酶切重组载体pPIC9K-mSxa,电击转化将m Sxa基因导入毕赤酵母GS115中,获得的转化子经过表型和遗传霉素G418抗性筛选、PCR鉴定,得到表达β-木糖苷酶基因的工程菌GS115-pPIC9K-mSxa;通过活性测定获得高效表达β-木糖苷酶的重组酵母,并对重组β-木糖苷酶的酶学性质进行了初步研究。结果表明,重组β-木糖苷酶的分子量约为66 kDa。在发酵罐水平表达的酶活性达到了287.61 IU/mL。对酶学性质研究显示,该酶在温度为40-60℃,pH为5.0-7.0时较稳定,其最适反应温度和pH分别为55℃和6.0,专一性地作用于β-木糖苷键。Mn~(2+)和Ca~(2+)对该酶具有激活作用,而Fe~(3+)、Cu~(2+)、Co~(2+)、Mg~(2+)、EDTA及SDS抑制其酶活性。本研究首次将反刍兽月形单胞菌的β-木糖苷酶基因转化到毕赤酵母中获得表达,并具有较高活性,为进一步工业化应用奠定了基础。     

广东大中型水库底泥重金属含量特征及潜在生态风险评价

广东省45宗大中型水库底泥重金属含量分析评价结果表明:除Cr外,广东省大中型水库底泥中Cu、Zn、Pb和Cd含量均高于广东省土壤重金属含量背景值.广东省四大地理区域中,粤北地区大中型水库底泥Cu、Zn、Pb和Cd平均含量均为最高,分别为89.71、321.21、154.95mg/kg和1.46mg/kg;其次是粤东和粤中地区;粤西大中型水库底泥Cu、Zn、Pb和Cd平均含量均为最低,但Cr平均含量居四大区域之首,为130.81mg/kg.粤东和粤北大中型水库底泥重金属富集系数以Cd最高;粤中和粤西大中型水库底泥重金属富集系数则以Cu最大.总体而言,粤北大中型水库底泥重金属具有很强的潜在生态风险,粤东和粤中大中型水库底泥重金属潜在生态风险程度为中等;粤西大中型水库底泥重金属属于轻微生态风险程度.结果说明,广东省大部分地区大中型水库底泥的重金属潜在生态风险主要是由于底泥中Cd的潜在生态风险系数过高所造成.人为生产活动,特别是矿产开采造成的污染是广东省大中型水库底泥重金属潜在生态风险等级提高的主要原因.     

薜荔和爱玉及其传粉昆虫繁殖特性

薜荔(Ficus pumila L．var．pumila)隶属桑科榕属,爱玉(F．pumila L．var．awkeotsanmg Corner)为其变种,它们的花是单性的,雌雄异株。雌花序中着生雌花,雄花序中有瘿花和雄花,每个花序中花的数量极多,达4000～6000朵。薜荔榕小蜂是唯一能进入薜荔和爱玉的隐头花序中产卵或传粉的共生昆虫,自然状态下雌花的结实率分别为82％、83．52％;瘿花的成虫瘿率分别为58．71％、51．32％,因此可形成大量的果实和虫瘿。物候观察表明薜荔和爱玉花期不遇,它们花序中的榕小蜂种群已经生殖隔离。人为的放蜂实验表明,生活于爱玉花序中的榕小蜂,已无法在薜荔花序中繁殖,生殖隔离进一步得到证实;实验同时表明爱玉的花粉亦不能使薜荔雌花结实,宿主两变种间生理上已不亲和。本文从共生双方协同进化的角度出发,探讨了榕树2变种间与传粉昆虫繁殖特性的差异,以及变种产生的主要原因。     

脑啡肽-干扰素α-m融合蛋白外用治疗单纯疱疹病毒感染

为探讨脑啡肽-干扰素α-m融合蛋白(EI)外用治疗单纯疱疹病毒感染的作用,分别用HSV-1感染兔子角膜、HSV-2感染豚鼠阴道建立动物感染模型.兔子角膜感染24h后用融合蛋白滴眼液治疗,每天3次,每次0.5ml,共14天.豚鼠阴道感染48h后,用融合蛋白涂剂抹外阴病灶,每天3次,每次10mg,共14天.用IFNα-m和生理盐水/赋形剂作为对照.采用记录病损程度分级法进行临床症消减观察,并于治疗前后测定实验动物病灶病毒滴度、HSV抗体滴度及NK细胞活性.结果显示:与IFNα-m相比,EI治疗组实验动物病毒感染症状大幅减轻且病程缩短,动物病灶中病毒滴度下降,抗HSV抗体滴度升高,NK细胞活性增强.说明脑啡肽干扰素融合蛋白具有较强的消除炎症和局部抗病毒作用,可用于治疗HSV感染引起的疾病.     

罗甲螨科分类研究进展(蜱螨亚纲:甲螨目:罗甲螨总科)

全面回顾了世界罗甲螨科120多年的研究历史,介绍了分类研究的代表人物及其所取得的成就.对中国罗甲螨科的分类研究也进行了回顾,同时介绍了世界及中国罗甲螨科各属种的地理分布.指出了目前该科分类研究中存在的主要问题,并对今后的研究工作进行了展望.     

AFM对人乳腺癌细胞外纤连蛋白原纤维的形态学观察

探讨原子力显微镜在研究细胞和细胞外基质间的相互作用及细胞外基质的功能等方面的应用前景。应用原子力显微镜观察培养的人乳腺癌MCF 7 R细胞分泌的纤连蛋白原纤维的分布和排列规律 ,并与其他常规观察技术进行比较。应用原子力显微镜获得了多个乳腺癌细胞和细胞外纤连蛋白原纤维的整体和局部形貌图像 ,发现这些原纤维的分布和排列方式非常有规律 ,而且这些规律与其功能相适应。由于样品制备简单和分辨率较高等优点 ,原子力显微镜较适合于细胞外基质的原位观察     

Skp2蛋白在牙龈癌中的表达及其临床病理学意义

目的:肿瘤细胞的增殖和发展与多种细胞周期调控因子的异常密切相关,Skp-2通过泛素化降解p27,使肿瘤细胞G1-S期调控发生紊乱,从而参与肿瘤细胞的某些生物学性状,本实验探讨牙龈癌发生发展过程中Skp2蛋白的表达以及其与牙龈癌临床病理学之间的意义.方法:收集同期46例牙龈癌及22例正常牙龈组织标本,制备组织切片,应用SP免疫组化法检测正常黏膜及牙龈癌中Skp2蛋白的表达,以及Skp2蛋白在牙龈癌不同病理分级和临床分期中的表达.结果:Skp2蛋白在正常口腔粘膜组织与牙龈癌中的阳性表达率差异有统计学意义,Skp2蛋白在牙龈癌中的阳性率(32.61％,显著高于正常黏膜组织4.55 ％)(x2=6.51P＜0.05).应用阳性表达率表示Skp2与牙龈癌的临床分期、病理分级、性别、年龄之间的关系,结果显示Skp2与牙龈癌的临床分期及病理分级显著相关成正比例关系,差异具有统计学意义(P＜0.05),而与年龄、性别等因素不相关,无统计学差异(P＞0.05).结论:Skp2蛋白在口腔牙龈癌的临床分级和病理分级成正比例相关,与年龄、性别无显著相关,Skp2可能在牙龈癌的发生发展中起着重要的正向调控作用,检测Skp2有助于判断牙龈癌的恶性程度及其预后,为临床判断病变程度及治疗提供更加合理的方案.     

出生时单剂接种非复制型MVA可诱导即时和长期保护性免疫应答

新生儿在出生后的短时期内就被认为是难以预防感染的,因为他们的免疫系统尚不健全,与成人相比在数量和质量上存在差异。然而,作者的研究表明,出生时用复制缺陷的、改良的痘苗病毒安卡拉株[MVA]活疫苗单剂接种小鼠后,可以有效诱导抗原特异性B细胞和T细胞应答,从而完全防止致死性的鼠痘病毒攻击。使用转基因小鼠可以在2周内诱导产生依赖于T细胞的保护性免疫应答。通过单剂疫苗接种可以获得持久的免疫T细胞记忆和中和抗体。     

吸附树脂分离蛹虫草发酵液中虫草素

采用吸附法替代离子交换法从蛹虫草发酵液中分离虫草素.首先从5种具有不同孔结构的吸附树脂中筛选出一种吸附容量高(29 mg/g)、容易再生的树脂KA-I,随后在pH为5.0时,在25、40和60℃条件下,测定虫草素在KA-Ⅰ上的静态吸附容量,其吸附容量随温度的升高而降低,吸附过程符合Freundlich模型(R2＞0.9...     

原子力显微技术在细胞生物学中的应用

对近年来原子力显微技术(AFM)在细胞生物学中的应用大致归纳为几个方面进行了简单介绍,还指出了细胞表面结构难于识别、细胞内部结构难以原位观察等AFM应用于细胞生物学中的难题,并提出了“形状探针”的概念以及超薄切片的思路以解决这些难题。AFM在细胞生物学中的应用研究还远远不足,需要更多的科学工作者加入其中。