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为了阻断家蚕核多角体病毒(BmNPV)的基因表达,以BmNPV的即刻早期蛋白基因(IE)为靶序列,设计了三联ribozyme.体外切割反应表明,该ribozyme能特异地切割靶序列的mRNA;细胞实验表明,细胞中表达的ribozyme也能够特异地切割靶序列,从而使受BmNPV感染的Bm-N细胞中的多角体减少约30%. 相似文献
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从p8218、pUR-222、pBV-114及pKC-30组建杂交质粒pBV一867,使人aD型干扰素基因在PL启动于控制下在大肠杆菌中能够直接表达。每升菌液的干扰素平均产量为0.8 x107单位。 相似文献
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我们用肺炎克氏杆菌的粗酶制剂研究了腺苷多磷酸化合物的酶促合成。在用30~50%饱和度硫酸铵沉淀蛋白进行的反应中,发现了二个化合物。经鉴定证明这二个化合物分别是A~5′ppp~5′A和A~5′pppp~5′A。本文还报道了一种制备α-~(32)P标记核苷酸的方法。 相似文献
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本文以人分裂细胞核抗原(PCNA)基因作为目的基因,把包括PCNA基因5′端非翻译区(5′NTR)的24bp和编码38个氨基酸114 bp的顺序插入pTZ19R,构建与LacZ’5′端的融合基因。用寡核苷酸定点突变法在PCNA 5′NTR形成SD顺序,再用PCR法在SD顺序左右两侧分别随机突变6个和7个碱基,使它们与结构基因5′端顺序自发地形成各种可能的翻译起始区(TIR)二级结构。重组质粒转化JM109(DE3),以T7 RNA聚合酶-T7启动子调控转录。对288个重组子的β-gal活性测定表明,不同重组的表达量可相差55倍,其中9个表达量不同的重组子的RNA dot blot证实它们在转录水平无明显表达差异。由此提示,该研究策略和方法能有效地改变目的基因的TIR二级结构和捕获具有高翻译起始效率的表达克隆。 相似文献
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人分裂细胞核抗原基因片段的筛选、测序及对启动子的分析 总被引:1,自引:0,他引:1
经6.6×105个克隆筛选,从装在λ噬菌体载体Charon30中的人基因库中筛选到了一个含人分裂细胞核抗原(PCNA)基因的克隆。经Southern杂交分析插入基因长约14kb,有较长的5'上游区,但3'端缺少一部分。经亚克隆和测序已确定从5'上游1263bp到3'端与λ载体接点共4969bpPCNA基因片段的核苷酸序列。将PCNA基因启动子核苷酸序列与DNA聚合酶α,拓扑异构酶Ⅱα,胸苷酸激酶基因的启动子进行比较有30%以上同源性,具有“看家基因”特征。在转录起始点的5'上游几百bp的范围内都有与CAT,SP1,E2F,NFHB,Oct1和ATF等转录因子的结合位点相似的核苷酸序列。 相似文献
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以嗜热脂肪芽孢杆菌为材料,通过PolyminP沉淀、硫酸铵分级及DEAE纤维素、磷酸纤维素、Blue-Sepharose、FPLCMonoQ、FPLC Superose12等柱层析,得到了部分纯化DNA解链蛋白BstH2。BstH2具有受DNA促进的ATP酶活力,没类型的核酸对BstH2的ATP酶活力的促进作用没。BstH2在55℃有最高ATP酶活力。这种活力受大肠杆菌单链DNA结合蛋白的抑制及随 相似文献
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增殖细胞核抗原(PCNA)是DNA聚合酶δ的辅助蛋白,它是细胞染色体DNA复制所必需的。人工设计的ribozyme具有可特异地切割PCNA mRNA的性质,将此ribozyme的自修剪体内表达质粒导入HeLa细胞,从细胞总RNA中分离相应部分能在体外切割靶RNA片段,证明此表达质粒在细胞内能表达出有活性的ribozyme分子。与对照相比,导入ribo-zyme表达质粒的HeLa细胞进入S期的时间从12 h推迟到20 h,而突变ribozyme的对照表明反义抑制对细胞进入S期的影响较小(推迟到15 h)。证明该ribozyme能有效抑制He-La细胞DNA复制,同时亦证明PCNA对于细胞DNA复制及细胞周期进程的重要性。 相似文献
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陆长德 《中国生物化学与分子生物学报》2002,18(6):6-6
敬爱的王德宝先生离开我们走了 ,我心中深感到无比的悲痛。在打倒“四人帮”以后 ,迎来了科学的春天。我作为文革后的第一批研究生来到了生化所 ,成了一名生命科学研究的新兵。二十多年来 ,慈祥、谦和、严谨、睿智的王先生一直指导、关怀着我的成长。王先生对我的教育有许许多多 ,这里谈谈自己的一些体会。在我当研究生的那段日子里 ,粉碎了种种思想上的禁锢 ,科研工作蓬勃开展。核酸室里 ,“酵母丙氨酸tRNA全合成”已经进入最后攻关时刻 ,其他各个小组的工作也都非常活跃。王先生既要具体领导酵母丙氨酸tRNA全合成 ,作为室主任他还… 相似文献
10.
目的Ribozyme两侧长片段附加列(LAS)的去除及其转录载体构建 总被引:4,自引:0,他引:4
选择小鼠腺苷脱氨酶mRNA特异Ribozyme做为目的Ribozyme(Rz),在目的Ribozyme两侧分别设计5-顺式Rz和3-顺式Rz,在目的Ribozyme上设计BmHI酶切位点,并构建了上述R8bozyme转录载体pSCRz262,采用该质粒进行体外转录,并对转录靶RNA分了进行了切割反应,结果显示pSCRz262在转录过程哪生了自身切割,并释放出目的Ribozyme-Rz262,该目的 相似文献