大肠杆菌发酵生产重组人颗粒溶素

目的:在FUS-50L生物反应器中利用补料分批培养技术培养表达含重组质粒pET28a( )-GNLY的大肠杆菌BL21(DE3)pLysS株,生产重组颗粒溶素(GNLY)。方法:选取含pET28a( )-GNLY的BL21(DE3)pLysS菌株单个克隆分级培养,将制备的二级种子液接种于发酵罐中。在发酵过程中,控制溶氧为30%～50%,温度为37℃;在基础培养基内生长4h后,补加以甘油为碳源的补料,继续生长到11h;加入葡萄糖至终浓度为1%,30℃诱导表达6h;收集菌体,纯化制备目的蛋白。利用Western印迹检测重组蛋白的抗原性,用CFU方法检测其生物学活性。结果:发酵液中最终菌体密度达80g/L;纯化所得重组蛋白约占菌体总蛋白的5%,含量为60mg/L;经鉴定所获重组颗粒溶素有较好的免疫学活性和生物学活性。结论:用含重组质粒pET28a( )-GNLY的大肠杆菌BL21(DE3)pLysS表达系统,可得到具有生物活性的重组颗粒溶素,为大批量生产提供了条件。     

微量失血对左肝外叶切除＋定容失血性休克大鼠生存率的影响

目的：观察在大鼠左肝外叶切除＋定容失血性休克模型制作过程中微量失血对最终大鼠生存率的影响。方法：45只SD大鼠按不同的放血比例分为三组,以Wigger改良法建立左肝外叶切除＋定容失血性休克模型,严格标化放血前的各项手术操作和观测指标,比较三组大鼠最终生存率的差异。结果：在分别按2．4ml／100g（A组）、2．5ml／100g（B组）、2．6ml／100g（C组）比例定容失血的大鼠模型中,各组大鼠生存率分别为：A组66．67％,B组42．86％,C组7．69％,A、B两组与C组大鼠的生存率相比较存在明显差异（P〈0．05）。结论：即使是0．1ml／100g的微量失血对于该模型大鼠的生存率也是有显著影响的,这一点在大鼠的定容失血性休克模型实验中是不应被忽视的。