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严重急性呼吸综合征冠状病毒2 (Severe acute respiratory syndrome coronavirus 2, SARS-CoV-2)是新型冠状病毒肺炎感染(Coronavirus disease 2019, COVID-19)的致病病毒。面对此类高传播风险及高致病性病毒,常采用复制缺陷型假病毒替代活病毒用于疫苗及药物的抗病毒活性评估。本研究旨在建立了一种基于流式细胞技术(Flow cytometry, FCM)的高通量中和试验方法。使用HIV-1慢病毒骨架蛋白包装系统,将psPAX2、pLVXeGFP、SARS-CoV-2 S三质粒共转染HEK293T细胞,包装一种带增强型绿色荧光蛋白(Enhanced green fluorescent protein, eGFP)的假病毒。通过优化S蛋白密码子序列、采用S蛋白C-端氨基酸(Amino acids, AA)截短和包装时间的优化,确定了假病毒包装最适条件。包装假病毒的滴定采用293T-hACE2细胞作为感染靶细胞,经流式细胞仪测定eGFP荧光细胞比率即为感染假病毒细胞比率。采用包装的野生型(Wild type, WT...  相似文献   
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