微量定磷法测定红细胞钙调素含量

 磷酸二酯酶在钙调素(CaM)激活下水解cAMP为AMP。后者经蛇毒水解为无机磷酸和腺苷。用孔雀绿显色测定无机磷酸量与标准CaM比较即可测出CaM活性。该法测定CaM灵敏度3.4ng,可测范围3.4—48ng,批间变异系数3.8％—6.4％。 纯化的红细胞(RBC)经超声破碎,沸水浴加热,离心上清与标准CaM所作的磷酸二脂酶平行激活曲线呈正相关(r=0.9900,p<0.0005)。RBC CaM含量测定,批间变异系数11.5％,回收率97.8％±2.0％。本法测得30例正常人RBC CaM含量为6.31±1.5fg/cell,性别之间无显著差异(p>0.5)     

钙调素依赖性环核苷酸磷酸二酯酶的简易粗提法

<正> 钙调素依赖性环核苷酸磷酸二酯酶(camodulindependent cyclic nucleotide phosphodiesterase, CaM-PDE)是研究环核苷酸和钙调素酶法测定必备的工具。由于其稳定性较差,不能长期保存,需经常提取。传统提取方法采用冷室中线性离子梯度DEAE纤维素柱层析与其它层析并用。本法利用DE_(52)柱层析,阶段离子浓度洗脱。纯化CaM-PDE近20倍。在足够的钙调素(CAM)存在下可激活10倍。