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从CHO工程细胞培养上清初步纯化的uPA免疫BALB/c小鼠,通过杂交瘤技术制备单克隆抗体细胞株,取其中一株38-1-7株作高密度大量培养,细胞密度达13.2×106/mL时,抗体滴度为1∶61.44×104。用自制的uPA-Sepharose4B柱纯化抗体。抗体滴度提高243倍。纯化后的抗体与活化的Sepharose4B珠交联,制成IgG-Sepharose4B亲和层析抗体柱,亲和力常数:1.28×109(mol/L)-1,交联率:83.5%。直接从培养上清纯化uPA,纯度为96.3%,回收率:81.6%±19,纯化倍数:50倍左右,比活1.11±0.29×105。试验结果表明该法效果好,方法简单、操作方便、值得进一步研究和应用。 相似文献
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不同哺乳动物细胞表达尿激酶原的研究 总被引:2,自引:0,他引:2
以重组尿激酶原(pro-UK)为研究对象,构建了细胞表达载体,对不同细胞表达载体进行了较为系统的比较性研究。确定了所构建pro-UK三种载体的表达特性,成功建立了pro-UK哺乳动物细胞表达系统。重组Namalwa、Vero和Sp2/0细胞表达proUK的水平分别是200、12.5和50IU/(10.6 cell.24h)。亲和层析纯化pro-UK纯度在90%以上。免疫吸附溶酰胺测定表明CHO细胞表达pro-UK单链比例最低,而Vero和Namalwa细胞表达pro-UK单链比例最高。该研究对生产pro-UK时,选择更好的哺乳动物细胞表达系统具有重要的指导意义。 相似文献
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