双孢蘑菇子实体发育后期差异表达蛋白质分析

为探讨双孢蘑菇子实体发育后期的蛋白质表达变化,对双孢蘑菇As2796子实体采收期、成熟期和开伞期的蛋白质组进行了双向电泳(2-DE)分析,发现了16个表达差异明显的蛋白质。通过质谱分析(MALDI-TOF/TOF MS)和数据库检索,有14个差异蛋白质获得鉴定。其中磷酸烯醇式丙酮酸水合酶与能量代谢相关,T-蛋白复合体1、蛋白酶体、5-甲基四氢三谷氨酸-同型半胱氨酸甲基转移酶、1-吡咯琳-5-羧酸脱氢酶、精氨酸酶与氨基酸或蛋白质代谢直接相关,而GTP结合蛋白则参与细胞的多种生命活动,在细胞的生长发育过程中起着重要的作用。另外7个为功能未知的蛋白质。     

巴氏蘑菇子实体不同发育阶段的转录组分析

为探讨巴氏蘑菇子实体不同发育阶段基因的表达情况,本研究对巴氏蘑菇子实体不同发育时期（原基、采收期和开伞期）进行转录组测序,以本实验室已获得的巴氏蘑菇JA菌株的不育单孢菌株JA-15036基因组为参考基因组研究原基与采收期及开伞期样本间差异表达基因,并对差异表达基因进行了GO功能和Pathway富集分析。GO功能分析结果显示,差异表达基因主要富集在跨膜转运、碳水化合物代谢途径和膜组分,它们协同调控为子实体生长发育提供稳定的内环境。KEGG富集分析结果表明,原基期上调的差异表达基因主要富集在核糖体蛋白和DNA复制,表明原基期细胞代谢旺盛,其中核糖体蛋白基因上调为后期蛋白质合成提供重要场所;采收期和开伞期子实体时期差异表达基因主要富集在碳水化合物代谢、脂肪酸降解和氨基酸代谢等途径,为巴氏蘑菇子实体的生长发育与成熟提供营养与能量。     

四氧嘧啶与链脲佐菌素诱导兔1型糖尿病模型的比较

目的观察四氧嘧啶(alloxan,ALX)与链脲佐菌素(streptozotocin,STZ)诱导新西兰兔1型糖尿病模型的差异,探讨建模的最佳方法。方法 70只新西兰兔分为3组:实验组56只,又随机分为ALX和STZ两组,每组28只,采用两次给药,第一次剂量为100 mg/kg,48 h后第二次给药,剂量为120 mg/kg;对照组C组14只,相同方法给予等量生理盐水。每组给药后于不同时间监测空腹血糖、尿糖、尿酮、空腹体重、饮水量、排尿量、渗透压及电解质变化情况。结果一周后ALX组和STZ组成模率分别为71.43%和64.26%,死亡率分别为25%和17.86%,两组之间比较成模率及死亡率均无明显统计学差异(P0.05);两组之间血糖浓度差异有统计学意义(P0.05)。结论 ALX与STZ分两次给药均可诱导稳定的兔1型糖尿病模型,从成模率、死亡率及建模成本综合考虑,ALX是建立兔1型糖尿病模型的优先选择。     

双孢蘑菇Septin基因Ab.Cdc3的克隆与分析

具有 GTPase 活性的 Septin蛋白广泛存在于除植物外的所有真核生物中,其功能多样。采用tBlastn将灰盖鬼伞Coprinus cinereus中与菌柄伸长相关的Septin蛋白Cc.Cdc3与双孢蘑菇基因组数据进行比对,在双孢蘑菇基因组中找到Cc.Cdc3同源蛋白编码基因Ab.Cdc3。生物信息学分析结果表明,Ab.Cdc3蛋白序列具有保守GTPase结构功能域。通过荧光定量PCR（quantitative real-time PCR,qRT-PCR）方法分析Ab.Cdc3在不同生长阶段的表达模式,结果显示该基因在子实体菌柄中表达量较菌丝、原基和菌盖中的表达量高;采后不同保藏时间样品Ab.Cdc3基因表达分析结果显示,在采后0h表达量显著高于采后12h和48h;这些结果为进一步研究该基因在双孢蘑菇生长发育中的功能提供参考。     

双孢蘑菇‘福蘑58'的选育报告

双孢蘑菇‘福蘑58'是W2000单孢分离筛选的新品种。菌落形态为贴生型,菌丝在10-32℃下均能生长,最适生长温度24-28℃。结菇温度10-22℃,最适结菇温度14-20℃。子实体单生为主,丛生少,较结实,不易开伞,菌盖扁半球形,表面光滑,颜色较白,直径3.5-5.0cm,高度2.4-2.8cm。在适宜栽培条件下,平均单产比亲本菌株W2000提高10%-15%,鲜菇质量与W2000相当,比W192提升明显,成品菇比例较高,品质优良,适合鲜销市场及罐头加工。该品种可用于周年工厂化、设施化及季节性农法栽培。     

双孢蘑菇子实体发育不同阶段蛋白质组分析

为探讨双孢蘑菇子实体发育不同阶段的蛋白质表达变化,对双孢蘑菇As2796菌株子实体原基期、幼菇期、采收期、开伞期的蛋白质组进行了二维液相色谱串联质谱（iTRAQ-MS/MS）分析,共获得不同肽段5 869个,鉴定到1 059个蛋白质,其中1 007个具有相对定量信息。与双孢蘑菇原基期相比,幼菇期、采收期和开伞期分别有差异蛋白质242、200、240个,分别占鉴定蛋白质总数的24.0%,19.9%和23.8%。对这些蛋白质及不同阶段之间的差异蛋白质进行了系列生物信息学分析,对8个上、下调表达具有连续性的差异蛋白质相关基因进行了荧光定量PCR验证,其中3个蛋白质（错配碱基识别蛋白、细胞色素C1及某推定的未知蛋白质）基因的转录与蛋白质的表达具有较为一致的趋势。这些结果为后续双孢蘑菇子实体发育相关基因的功能研究奠定了良好的基础。     

双孢蘑菇耐热相关基因的表达载体构建及转化研究

构建了双孢蘑菇Agaricus bisporus耐热相关基因028-1全长cDNA序列的双元表达载体,通过农杆菌介导转化双孢蘑菇非耐热菌株8213,经潮霉素抗性筛选和PCR鉴定,获得了一批双孢蘑菇转基因菌株。对10株转基因菌株进行了不同温度下的草管走菌试验,结果显示大部分转基因菌株的耐热性能有较为明显的提高。     

双孢蘑菇部分cDNA文库的构建及筛选

构建了双孢蘑菇Agaricus bisporus菌株AA和A41的部分cDNA文库,其滴度分别为1.0?05 pfu/ml和6.0×104pfu/ml。用地高辛标记的丛生差异片段探针对文库进行筛选,分别获得5个和3个阳性克隆。     

双孢蘑菇野生种质资源营养成分分析与评价

为了评价双孢蘑菇野生种质资源的营养成分,筛选具有较好或特殊营养成分的种质,为双孢蘑菇育种提供科学的参考依据。以3份主栽品种为对照,分析评价了93份双孢蘑菇野生种质材料的蛋白质、氨基酸和脂肪酸的营养成分含量,并以营养成分含量均高于均值为依据筛选营养高效均衡的种质资源。结果表明,双孢蘑菇野生种质的蛋白质含量为29.50-37.60 g/100g,必需氨基酸含量为4.51-8.89 g/100g,必需氨基酸的比例为24.69%-40.59%,亚油酸含量为4086.55-14190.28 mg/kg,不饱和脂肪酸的比例为77.63%-87.47%。氨基酸的平均变异系数21.05%,亚油酸的变异系数22.93%。93份双孢蘑菇野生种质资源中氨基酸、脂肪酸含量存在丰富的变异,基于实验结果筛选到14份营养高效均衡的种质资源,可为双孢蘑菇品质提升定向育种提供亲本材料。