特异性血清中白介素1β放射免疫分析的建立及初步应用

人工重组的白细胞介素１β（ＩＬ－１β）多次免疫兔和豚鼠,获取高效价的兔抗ＩＬ－１β抗体。用氯氨Ｔ法制备１２５Ｉ标记ＩＬ１β,经Ｓｅｐｈａｄｅｘ Ｇ－２５纯化。该法测定范围０．０６-４ｎｇ／ｍ ｌ,批内和批间误差分别小于５％ 和１０％ 。正常人血清含量为０．２４±０．０８ｎｇ／ｍ ｌ（ｎ＝１３８）。人粒细胞系ＨＬ６０（１０６）细胞体外培养２４ 小时,不能检出上清液中ＩＬ－１β,钙离子载体Ａ２３１８７和磷脂酶Ａ２ 抑制Ｐ－ＢＰＢ也不能显著提高细胞释放ＩＬ－１β。另外,肝癌甲胎蛋白阳性患者血清中ＩＬ－１β水平同正常人没有显著差异。但是,雄性老龄大鼠血清ＩＬ－１β水平明显高于雌性老龄大鼠（Ｐ＜ ０．０１） 。     

人脂皮素-1cDNA的克隆及其在大肠杆菌中的表达

脂皮素1(LC1)是钙依赖性的膜磷脂结合蛋白,介导糖皮质激素的抗炎作用。本研究采用RTPCR法获取人LC1cDNA,以pUC18为克隆载体、pBV220为表达载体,在DH5α菌成功表达了LC1,免疫印迹实验证实了重组蛋白的免疫活性 。     

磷脂酶A2阻断剂对失血性休克再灌注损伤的保护作用

磷脂酶Ａ２阻断剂对失血性休克再灌注损伤的保护作用颜光涛郝秀华王录焕江潮光１田亚平２王成彬２李振甲（解放军总医院临床医学研究所,１科训处,２生化科,北京１００８５３）磷脂酶Ａ２（ＰｈｏｓｐｈｏｌｉｐａｓｅＡ２,ＰＬＡ２）激活后水解释放花生四烯酸代谢产物...     

特异性白介素1受体拮抗蛋白放射免疫分析的建立及初步应用

用人工重组的白介素1受体拮抗蛋白(I1ra)免疫新西兰兔,获取高效价特异的IL1ra抗体。用氯氨T氧化法制备125I标记IL1ra,经SephadexG25纯化,竞争性抗原抗体反应采用非平衡法,标准品和待测样品同抗体反应37℃6小时后加入125I标记抗原继续反应4℃24小时。经PR试剂分离结合和分离的标记抗原。该法标准曲线范围3～96ngml,最低检出量为(90±14ngml,n=89),类风湿因子阳性的病人血清含量为(3906±1523ngml,n=14)。肠缺血再灌损伤后6小时大鼠血清中IL1ra较伤前自身对照明显增加(P<0001,n=82)。肺灌洗液中损伤前后没有明显差异。该法特异、灵敏、简便,可用于人血清和大鼠血清及肺灌注液中IL1ra的分析 。     

磷脂酶A2对中性粒细胞趋化和粘附的影响

胰源性１４×１０￣３ｕ磷脂酶Ａ＿２（ＰＬＡ＿２）在体外同大鼠中性粒细胞（ＰＭＮ）培养６０ｍｉｎ后,细胞对ＴＮＦ趋化增强,培养１０ｍｉｎ后上清液中血栓素（ＴＸＢ＿２）含量比正常增高（Ｐ＜０．０１）。前列环素（ＰＧＩ＿２）含量不变。ＰＬＡ＿２激动剂Ａ２３１８７也能显著加强中性粒细胞对ＴＮＦ的趋化,并伴有ＴＸＢ＿２释放增多（Ｐ＜０．０１）。此外,ＰＬＡ＿２和Ａ２３１８７还显著增强ＰＭＮ对玻璃珠的粘附活性。使用ＰＬＡ＿２抑制剂二溴苯乙酮（ＰＢＰＢ）和ＰＬＡ＿２多克隆抗体可抑制外源性ＰＬＡ＿２对ＰＭＮ趋化和粘附的增强作用,但对Ａ２３１８７的调节作用无效。以上结果表明ＰＬＡ＿２激活及其代谢产物可能介导ＰＭＮ趋化和粘附作用。     

雄性大鼠血浆,消化道粘膜层胃动素含量测定

本文采用作者建立了放射免疫测定法,测定了１６只大白鼠消化道不同部位粘膜中胃动素Ｍｏｔｉ－ｌｉｎ（ＭＴＬ）含量和血浆ＭＴＬ含量。结果表明：贲门表明：贲门粘膜中ＭＴＬ含量最高,并依次为胃体,幽门、十二指肠、小肠。经统计学处理,贲门与胃白组,幽门与十二指肠组,十二指肠与小肠组均呈显著性差异。     

磷脂酶A2活性对中性粒细胞凋亡的影响

细胞凋亡（Ａｐｏｐｔｏｓｉｓ）是一种机体保持内环境稳定的特殊方式。正常情况下,中性粒细胞（ＰＭＮ）绝大部分通过凋亡而被清除,避免因坏死而造成组织损伤。我们在研究磷脂酶２（ＰＬＡ２）激活介导创伤和感染的机理时,发现其活性介导ＴＮＦ对ＰＭＮ的激发作用。其它证据也显示ＰＬＡ２及其代谢产物在细胞凋亡过程中发挥作用,我们推测ＰＬＡ２活性对ＰＭＮ凋亡或坏死的影响,可能是控制炎症反应的主要途径。这方面的工作尚少见,本文初步报告如下。１　材料和方法（１）材料和主要试剂　雄性Ｗｉｓｔａｒ大鼠由本院动物中心提供。Ｐ…     

高灵敏白介素6放射免疫分析的建立及初步应用

用人工重组的白介素6(IL-6)多次免疫兔和豚鼠,获取高效价的IL-6抗体.用氯氨T法制备 ¹²⁵I标记IL-6,经Sephadex G-25纯化,抗原抗体反应采用平衡一步法,4℃温育24 h后经PR试剂分离结合和游离的标记抗原.该法测定范围0.1～3.2 μg/L最低检出量为0.l μg/L,批内和批间误差分别小于6.4％和10％.健康男性115例血清IL-6含量为(0.27±0.13) μg／L.女性101例血清IL-6为(0.26±0.10) μg/L.男女无差异.此外,用该法检测兔失血性休克再灌注损伤后24 h血清IL-6水平明显升高.失血性休克大鼠淋巴液中IL-6水平明显上升,经山莨菪碱（l mg／kg）治疗休克后IL-6又明显下降.内毒素同人牙周纤维细胞共同培养不同时间也促进IL-6释放并明显高于对照水平.     

磷脂酶A2介导肿瘤坏死因子诱发的中性粒细胞趋化和粘附增强

肿瘤坏死因子（ＴＮＦ）对外周中性粒细胞（ＰＭＮ）具有重要调节作用。本文采用生化及放射免疫技术,观察体外重组ＴＮＦ对ＰＭＮ趋化、粘附及血栓素Ｂ２（ＴＸＢ２）和前列环素（６－ｋｅｔｏ－ＰＧＦ１ａ）释放的改变。ＴＮＦ（１００ｍｇ／ｍｌ）处理６０ｍｉｎ后,ＰＭＭ对白细胞趋化因子（ＦＭＬＰ）趋化和玻璃珠粘附性均显著增加,同时伴有ＴＸＢ２释放增多,６－Ｋｅｔｏ－ＰＧＦ１ａ不变。这提示ＴＮＦ体外促ＰＭＭ趋化和粘     

磷脂酶A2激活对中性粒细胞趋化和粘附的作用

外源性磷脂酶A2(Ⅰ型PLA2)和钙离子载体(A23187)可明显促进中性粒细胞对TNF,FMLP的趋化及同玻璃球的粘附.PLA2抑制剂二溴苯乙酮(PBPB)和PLA2抗体对PLA2诱发的趋化和粘附具有浓度相关的抑制作用,而对A23187的相同作用并无影响.提示PBPB和PLA2抗体可能通过直接同PLA2作用而抑制PMN趋化和粘附,A23187诱导的促趋化及粘附作用可能不同于PLA2.