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试图探讨缺氧反应元件（hypoxia-responsive element,HRE）增强人前内皮素原-1基因（human preproendothelin-1,ppET-1）启动子在缺氧条件下靶向调控血管内皮生长因子（vascular endothelial growth factor,VEGF）基因在内皮细胞中的表达,以提高基因治疗的效果．构建真核表达载体pEGFP—HRE．ppET-1,pcDNA3．1-VEGF＋Pa（VA）,pcDNA3．1-ppET—1＋VEGF＋Pa（PVA）,pcDNA3．1-HRE．ppET-1＋VEGF＋Pa（HPVA）,脂质体转染离体培养的脐静脉内皮细胞（HUVEC）和肝细胞,荧光显微镜下观察GFP表达,验证HRE．ppET-1调控元件在内皮细胞中的特异性．培养基中加入100μmol／L的氯化钻模拟细胞体外缺氧环境．载体转染后,RT-PCR和Western blot半定量分别检测各载体VEGF mRNA和蛋白水平在常氧及缺氧条件下的表达差异．应用Elisa定量检测细胞上清VEGF蛋白的表达量,分析各载体的表达水平．使用MTT实验检测细胞增殖率．GFP的表达显示HRE．ppET-1调控元件在内皮细胞中可有效转录外源基因,在非内皮细胞中表达极弱．RT—PCR,Western Blot及Elisa的检测结果均表明缺氧条件下HPVA组以及PVA组中,VEGF的表达均较常氧条件下增强（P〈0．05）．MTT实验检测显示HPVA转染的缺氧条件下的HUVEC增殖率超过其常氧未转染对照组．结果显示,HRE．ppET-1调控元件具有内皮细胞表达特异性,并能在缺氧条件下显著提高VEGF的表达,刺激内皮细胞的增殖,为进一步开展内皮细胞的靶向基因治疗研究奠定良好基础． 相似文献
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