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目的:克隆β2-肾上腺素能受体(β2-AR)全长基因片段.方法:根据GenBank中收录的猪β2-AR cDNA序列设计一对引物,以猪肝脏组织总RNA为模板,利用RT-PCR技术扩增目的基因,将其与pUC18载体体外连接,转化感受态大肠杆菌E.coil DH5α,筛选阳性克隆.结果:扩增出一条1257 bp的目的基因片段,该片段编码418个氨基酸.与CenBank中收录的猪β2-AR序列比对,其同源性为99.52%,编码的氨基酸有99.04%相同.结论:成功获得了β2-AR全长基因片段,为该基因的表达和受体筛药模型的建立奠定基础. 相似文献
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目的探究Ghrelin对高糖诱导的内皮损伤的保护作用及机制。方法将人血管内皮细胞(HVECs)分为5mmol/L d-葡萄糖组、30mmol/L d-葡萄糖组、30mmol/Ld-葡萄糖+4mmol/L ghrelin组、30mmol/Ld-葡萄糖+20mmol/L ghrelin组和30mmol/L d-葡萄糖+100mmol/L ghrelin组。采用流式细胞术检测细胞凋亡,采用MTT法检测细胞活性,采用过氧化物敏感性荧光探针二氯二氢荧光素二乙酸酯(DCFH-DA)检测细胞内ROS水平,采用Western blot检测细胞胞浆中p65、HO-1、Bcl-2、Bax和cleaved caspase 9水平。结果与5mmol/L d-葡萄糖组比较,30mmol/L d-葡萄糖组细胞凋亡明显增加,活性降低,ROS生成增加和cytosolic p65和Bax水平均显著降低,HO-1、Bcl-2和cleaved caspase 9水平显著升高;与30mmol/L d-葡萄糖组比较,ghrelin治疗组的细胞活性明显增加,凋亡率明显降低,ROS产生减少,胞浆p65和Bax水平均显著升高,HO-... 相似文献
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