带有白花甜菜染色体片段的栽培甜菜易位系的筛选

本文采用斑点杂交方法,对近100%传递的甜菜单体附加系M14(2n=19)发生分离的后代反转系(2n=18)进行研究,采用随机引物法标记白花甜菜特异探针,对80株反转系进行杂交实验,结果筛选出19个易位系,这19个易位系有待于进一步研究,证明是否带有无融合生殖基因。     

甜菜单体附加系M14花蕾cDNA文库的构建

为了克隆甜菜单体附加系M14无融合生殖相关基因 ,采用cDNA文库快速构建法制备了M14花蕾cDNA文库。根据甜菜单体附加系M14无融合生殖的细胞胚胎学研究结果 ,提取甜菜M14花蕾三个关键时期的RNA ,分离纯化mRNA ,以Oligo(dT)为引物 ,在逆转录酶的作用下 ,合成第一链cDNA ,进而合成第二链cDNA。含有EcoRⅠ和NotⅠ粘性末端的双链cDNA在T4DNA连接酶的作用下与载体λZAP臂相连 ,并对连接产物进行体外包装 ,得到噬菌体颗粒 ,即甜菜单体附加系M14花蕾cDNA文库。经大肠杆菌寄主菌株XL1-blueMRF’平板检测 ,三个文库滴度分别为 2 .8× 10 5pfu·mL-1、1.6× 10 5pfu·mL-1和 3.5× 10 5pfu·mL-1,克隆重组率为 83%、78%和 81%。cDNA文库可直接用于目的基因的筛选