P57,P53,bcl-2,ki-67联合应用在葡萄胎诊断中的意义

目的:研究p57,P53,bcl-2,ki-67蛋白表达在完全性葡萄胎(CM)、部分性葡萄胎(PM)及水肿流产胎(HA)的诊断及鉴别诊断意义.方法:对21例完全性葡萄胎,28例部分性葡萄胎,18例水肿流产胎的标本进行4种抗体免疫组化分析,同时选取10例正常胎盘组织作为对照.结果:在CM中,p57表达不明显,而P53,bcl-2,Ki-67表达增强;在PM,HA及对照组中p57呈现高表达,P53,bcl-2,Ki-67则表达较弱.这四种抗体的表达在完全性葡萄胎与部分性葡萄胎、水肿流产胎及对照组之间的差异具有显著性(P＜0.01),而部分性葡萄胎与水肿流产胎、水肿流产胎与对照组之间差异不显著(P＞0.05).结论:p57和Ki-67表达对CM,PM和HA的鉴别诊断有重要作用,而P53,bcl-2表达对判断预后及预测恶变风险有意义.     

用慢病毒转染RNAi技术沉默胆固醇7α羟化酶的基因表达，降低肝细胞中胆汁酸的分泌

为了降低生物人工肝(bioartificial liver system)中肝细胞胆汁酸的分泌,构建了胆固醇7α羟化酶慢病毒RNA干涉载体,并转染人肝脏细胞(L-02).根据绿色荧光蛋白的表达评估转染效率后进行流式分选,获得高表达慢病毒干涉载体的细胞,并以野生型L-02细胞和仅转染pSicoR空载体的L-02细胞作对照,观察肝细胞胆固醇7α羟化酶的表达以及培养上清中总胆汁酸含量.利用半定量PCR、实时荧光定量PCR及Western-blot等实验方法检测了转染细胞中基因的干涉效果,结果显示:与对照组相比,在mRNA水平,转染慢病毒siRNA载体的L-02细胞,其胆固醇7α羟化酶基因的表达量仅为野生型L-02细胞表达量的31.2%,为转染pSicoR空载体的L-02细胞的34.1%,干涉效率分别为68.8%和65.9%,均具有显著差异(P＜0.05);Western-blot结果显示胆固醇7α羟化酶在蛋白质水平表达也明显受到抑制,表明转染慢病毒siRNA下调了肝细胞中胆固醇7α羟化酶基因的表达,减少了胆汁酸的分泌.以上研究结果表明,利用RNAi技术可以获得低表达胆固醇7α羟化酶基因的肝细胞,并有效降低肝细胞中胆汁酸的分泌,为临床上生物人工肝的构建及应用奠定基础.