转Bt基因抗虫棉对蚯蚓行为、生长及代谢的影响研究

本研究以蚯蚓的趋避性行为、体重及瞬时生长速率、纤维素酶(EG、BG、CBH)为指标,以转Bt基因棉和常规非转基因棉苗期、花铃期和拔柴期的根部为实验材料,研究了转基因与非转基因棉花根对蚯蚓趋避性行为、生长速率和纤维素酶活性的影响。实验结果表明,蚯蚓对棉花根存在趋向性,棉花根可以增加蚯蚓的体重和瞬时生长速率,且可以提高蚯蚓纤维素酶的活性。转基因和非转基因棉花根对蚯蚓的影响无显著差异。     

中华根瘤菌NP1腺苷酸激酶基因的克隆与功能鉴定

以中华根瘤菌NP1（Sinorhizobium sp. NP1）为原始菌株,通过同源克隆的方法,获得了579 bp的腺苷酸激酶基因（adk）全长序列. 该基因编码192个氨基酸,其二级结构和三级结构与Sinorhizobium meliloti 1021 ADK的二级结构和三级结构相似. 以表达载体pET21b为原始载体,构建成NP1 adk原核表达载体pET21b-adk,转化E.coli BL21菌株, SDS-PAGE检测表明：adk基因获得高效表达. HPLC测定证实：重组表达菌中ATP含量约为对照的1.3倍. 上述结果证明本实验中所克隆的腺苷酸激酶基因具增强ATP合成的功能.     

中华根瘤菌NP1氨单加氧酶基因的克隆与功能鉴定

以中华根瘤菌NP1(Sinorhizobium sp.NP1)为原始菌株,通过同源克隆与Tail-PCR方法,获得1089bp的氨单加氧酶基因(amo)全长序列.该基因编码362个氨基酸,其二级结构与Sinorhizobium meliloti1021AMO的二级结构相似,该蛋白有9个跨膜区段.以自杀穿梭质粒pJQ200SK为原始载体,构建NP1amo基因敲除质粒pJQ200SK-amo-Tc.采用三亲本杂交的方法将该质粒转入原始菌株NP1中,获得amo基因敲除菌株NP1∷amo.通过本贝洛氏(Berthelot)法对氨氮进行测定,发现NP1∷amo的脱氮效率比原始菌株NP1下降约35%.该结果表明,本实验中所克隆的氨单加氧酶基因为脱氮关键酶基因.