PPENK-MIDGE-NLS基因载体的构建及其在活体大鼠的表达

增加体内免疫细胞合成分泌内源性阿片肽,可对心肌缺血再灌注损伤产生保护作用。基因治疗是增加内源性脑啡肽(Enkephalin,ENK)的一种有前景的研究方向,但是以往的病毒、质粒等载体受到其自身免疫原性的限制并存在基因重组、原癌基因激活、抗细菌蛋白抗体产生以及基因表达改变等诸多问题。本研究采用非病毒、非质粒的微量免疫原定义的基因表达(Minimalistic immunological defined gene expression,MIDGE)方法构建前脑啡肽原(Preproenkephalin,PPENK)PPENK-MIDGE-NLS基因载体能克服病毒和质粒载体的上述缺点。用PCR技术扩增大鼠前脑啡肽原(Preproenkephalin,PPENK)外显基因,产物插入p EGFP-N1质粒,双酶切质粒获得包含启动子、目的基因、RNA稳定序列的线性载体,两端以不受外切酶作用的发夹样脱氧寡核苷酸序列(Oligodesoxynucleotides,ODNs)封闭。为保证载体的入核和表达效率,载体的一端连接了核定位序列(Nuclear localization sequence,NLS)。流式细胞术和激光共聚焦检测其转染效率,Western blotting检测组织内前脑啡肽蛋白的表达。结果显示,PPENK-MIDGE-NLS能够转染大鼠活体细胞并表达前脑啡肽蛋白,增加载体的量能够在一定范围内提高转染效率。研究结果表明该载体可能成为预防和治疗心肌缺血再灌注损伤的新方法。     

多维液相色谱分离技术在复杂蛋白质组学样品鉴定中的应用

目的：随着蛋白组学技术的发展,液相色谱-串联质谱的联用技术（液质联用）逐渐成为蛋白组学的主流技术。方法：通过结合各种不同原理的色谱分离类型,多维液相色谱分离技术能够极大的提高分离系统的峰容量,达到有效分离复杂程度很高的蛋白质组学样品的目的。结果：最广泛使用的多维液相色谱分离系统是离子交换色谱（IEX）和反相色谱（RP）的二维结合,近年来又发展出了分离能力更强的三维液相色谱分离系统,并且已经在蛋白质组学研究中得到了应用。结论：本文综述了多种多维液相色谱分离方法,在这些方法中,不同的分离原理的色谱类型被用于肽段或蛋白混合物的预分离中,有效促进了样品的充分分离,极大地提高了复杂样品的蛋白组学鉴定能力。     

重组C8orf32蛋白的表达、纯化及抗体制备

C8orf32是一种功能未知基因,其mRNA含量在乳腺癌组织中显著高于正常乳腺组织。将其开放式阅读框插入pGEX-6P1原核表达载体T7启动子控制下的GST编码基因下游,构建了C8orf32蛋白表达质粒pGEX-6P-C8。表达质粒转化入大肠杆菌BL21(DE3)菌株,经IPTG诱导,成功表达了GST- C8orf32融合蛋白。经带有GST标签的位点特异性蛋白酶切割除去GST-C8orf32融合蛋白的GST标签,获得了N端带有8个多余氨基酸残基的C8orf32蛋白,蛋白纯度为95%左右。N端氨基酸序列分析表明该蛋白N端氨基酸序列正确,质谱鉴定进一步证明所表达C8orf32蛋白的正确性。用制备的C8orf32蛋白免疫新西兰白兔,获得了能够正确识别C8orf32蛋白的抗血清。该蛋白及其抗体的成功制备,为进一步研究C8orf32蛋白的结构功能和体内分布打下了基础。     

300 mT恒磁场对于糖尿病大鼠创伤愈合的影响

目的:研究300mT恒磁作用对于糖尿病大鼠皮肤创伤愈合的修复效果,旨在为其系统的临床应用提供理论依据.方法:8周龄雌性SD大鼠,体重220±20g,行腹腔注射50mg/kg链脲做菌素,3天后空腹血糖高于16.7 mmol/L的大鼠用于实验.32只糖尿大鼠病和16只正常大鼠的背部构建直径2cm的圆形创口,将动物随机分为对照组、糖尿病组、糖尿病恒磁场作用组,每组16只,术后一天采用无菌纱布将创口进行包裹,磁场作用组的纱布表面粘附有300 mT中心场强的钕铁硼恒磁片.分别于第6、13、20天每组处死4只大鼠,对其进行创伤愈合率和创伤表皮组织生物力学实验评估.结果:相比于糖尿病组,糖尿病恒磁场治疗大鼠的伤口愈合速度在第6、13、20天显著提高(P＜0.05),伤口组织的抗张强度亦显著提升(P＜0.05),其愈合速度接近于正常状态下的大鼠.结论:300mT恒磁场作用对于促进糖尿病大鼠皮肤创伤的愈合速率具有积极的治疗作用,恒磁场治疗凭借经济、简单、方便等特点,具有广阔的临床应用前景.     

心脏手术围术期的血糖波动与术后急性肾损伤

心脏手术围术期高血糖与术后并发症的关系已经得到大量研究,高血糖与术后肾功能损伤的关系存在着不同的观点,但是对于围术期血糖水平的波动与术后肾损伤的研究甚少。本文概述了心脏手术围术期血糖水平波动对术后肾功能损伤的影响,简要分析其损伤机制。研究表明,多种因素可以增加围术期血糖水平的波动,对多项围术期高血糖是否增加术后肾功能损伤的研究争议分析发现,围术期血糖水平的波动对术后肾损伤的发生起到潜在作用,其损伤机制主要在于引起氧化应激和血流动力学的波动。相信围术期血糖水平的波动对术后肾功能损伤的影响的进一步的研究,将有助于降低心脏手术后急性肾损伤患者术后并发症的发生率。     

低强度激光照射对糖尿病大鼠创伤愈合的治疗效果研究

目的:低强度激光的生物效应已经得到广大科研工作者和临床医生的广泛关注,诸多研究证明低强度激光能够促进创伤组织的修复,但是其对于糖尿病创伤的组织愈合效果目前仍鲜有报道.本文旨在系统探索650 nm波长的低强度激光照射对糖尿病大鼠皮肤创伤愈合的作用效果.方法:3月龄雄性SD大鼠,腹腔注射50 mg/kg的链脲做菌素,3天后检测空腹血糖值,高于16.7mmol/L的大鼠用于实验.于48只大鼠(32只糖尿病+16只正常)的背部构建直径2 cm的圆形创伤切口,将大鼠随机分为对照组、糖尿病组、糖尿病激光治疗组,每组16只,激光组大鼠伤口每天暴露于650 nm激光下2h.每组分别于第5、12、19天处死4只大鼠,对其进行创伤愈合率和创伤表皮组织生物力学实验评估.结果:相比于对照组,糖尿病大鼠的伤口愈合速度在第5、12、19天均显著降低(P＜0.05),伤口完全愈合时间显著增加(P＜0.05),伤口抗张强度显著下降(P＜0.05).低强度激光刺激显著提高了第5、12、19天大鼠伤口的愈合速度(P＜0.05),显著降低了伤口的愈合时间(P＜0.05),显著提高了伤口抗张强度(P＜0.05).结论:650nm低强度激光能够显著加速糖尿病大鼠创伤的延迟愈合,使其愈合速度接近于正常状态的组织,该研究揭示了650nm波长下的低强度激光治疗具有良好的用于促进糖尿病患者伤口愈合临床应用前景.     

单肺通气时低氧血症的预防的研究进展

单肺通气技术广泛用于开胸手术的麻醉处理,低氧血症是其主要并发症。低氧血症严重影响病人的正常生理功能,是麻醉医生和外科医生面临的重大挑战。因此,尽可能地预测,预防和处理低氧血症非常重要。术前肺功能、哪侧手术、肺血流灌注是其发生的重要预测因素。使用合理的通气方式,麻醉方法及药物会降低单肺通气时低氧血症的发生。本文综合分析了单肺通气时低氧血症的预防进展,以期减少其发生率。