电压门控快钾通道蛋白Kv4.3的抗体制备及检测

Kv4(voltagegated K^ channel4)是在哺乳动物心脏和脑组织中广泛表达的一类钾离子通道蛋白．它主要介导心肌细胞和神经细胞中的A-型(快速失活型)K^ 电流,是构成中枢神经系统和心肌细胞中的快速失活外向型电流的基础．Kv4．3是电压门控钾离子通道3种α亚基之一．通道中含有许多具有调节作用的辅助亚基,它们通过与Kv4．3互作实现对通道的调节．本研究根据人类氨基酸序列以MAPs法制备抗Kv4．3抗体．MAP由4条相同的17肽段连接成锥形结构分子．以MAP或MAP与佐剂免疫新西兰白兔,抽提了免疫前血清和免疫后血清,并对抗体的滴度进行评价．MAPs在白兔体内诱导出了效价比为1：1000的抗Kv4．3特异性抗体．     

一种改进的原代神经元的制备方法

神经元是神经组织的结构和功能单位。从胚胎中分离出神经元时,由于它们在原位组织中完成了分裂和分化,原代培养的神经元将不会分裂、增殖。18d孕龄的SD大鼠胎鼠脑组织中分离原代神经元的过程中,采用了改进的细胞分离方法。分离的原代细胞经免疫荧光实验证实含有大量的神经元。pEGFP质粒转染和细胞免疫荧光实验结果显示,转染的原代神经元中GFP报告基因有较高的表达,这表明,原代培养的神经元适宜于后续实验的进行。在对改进型方法和传统型方法的细胞分离效果比较时,发现改进型方法在消化过程中产生的gDNA絮状物较传统型的少,接种后发现细胞分散均匀,无杂物。所获得的原代细胞的总数比传统型方法多出大约23％。