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1.
目的 探讨慢病毒载体介导人肿瘤细胞RNA干扰的影响因素。方法 以乏氧诱导因子-1α(Hypoxia-inducible factor-1α, HIF-1α)和乏氧诱导因子-1β(Hypoxia-inducible factor-1β, HIF-1β)基因为靶基因,采用Invitrogen公司的BLOCK-iT Lentiviral RNAi Expression System生产表达靶基因shRNA的慢病毒载体,转导Hela、SPCA1和A549,采用定量RT-PCR技术检测靶基因mRNA表达水平。结果 用此系统生产慢病毒,每一10cm培养皿可收获6.3×1010个病毒颗粒。浓度为2×1010copies/ml的Lenti6-HIF1α和Lenti6-HIF1β转导SPCA1、A549和Hela细胞的功能滴度分别为:1.8×106TU/ml、1.2×106TU/ml、1.75×106TU/ml和1.76×106TU/ml、1.21×106TU/ml和1.79×106TU/ml。延长病毒的吸附时间可以提高转导效率, 8小时以内转导效率与吸附时间呈正比,12小时开始进入平台期。1/4、1/2、1、2、4、8倍MOI的Lenti6-HIF1α病毒转导SPCA1和Hela细胞48小时后,RNAi效果与病毒量呈正相比。用筛选的转导细胞证实,RNAi长期效果与细胞类型无关,但与shRNA表达结构整合到靶细胞基因组的拷贝数呈正相关。结论 慢病毒载体介导人肿瘤细胞RNA干扰,短期基因抑制效果取决于细胞类型、病毒量和病毒的吸附时间,稳定基因沉默效果与病毒整合到靶细胞基因组的拷贝数密切相关。  相似文献   
2.
前列腺癌的早期信号——IGF-I   总被引:1,自引:0,他引:1  
前列腺癌是男性易发的疾病,在欧美发病率极高,在高龄男性中仅次于肺癌。我国前列腺癌发病率在逐渐增加。人前列腺特异性抗原(PSA)是前列腺上皮分泌的一种糖蛋白。前列腺癌发生时会释放大量PSA进入血液,因此测定血清PSA在前列腺癌的诊断和治疗后追踪方面有重...  相似文献   
3.
前列腺癌的早期信号--IGF-Ⅰ   总被引:7,自引:0,他引:7  
前列腺癌是男性易发的疾病,在欧美发病率极高,在高龄男性中仅次于肺癌.我国前列腺癌发病率在逐渐增加.  相似文献   
4.
 为探讨雄激素对人前列腺中鸟氨酸脱羧酶( O D C)基因表达的调节作用,以研究雄激素诱导前列腺良性增生的分子机理,分离培养了人胎儿前列腺间质细胞,以 M T T 法测定不同浓度 D H T对细胞的促增殖作用;以最适浓度的 D H T(1 000 μg/ L)刺激该细胞,分别于 0,3,6,12,24,30 h 提取总 R N A,用斑点杂交及 Northern blot 法分析测定各组细胞中 O D C m R N A 的丰度,并对杂交膜进行薄层扫描定量.结果显示:(1) D H T 对前列腺间质细胞的增殖呈双相调节作用,即在低浓度时随着 D H T 浓度的增加,对该细胞的促增殖作用增强,1 000 μg/ L时刺激活性最强,高浓度 D H T 对该细胞的刺激作用降低.(2)斑点杂交显示,在 1 000 μg/ L D H T 刺激细胞后 6 h 时, O D C m R N A开始明显升高,24 h 达高峰(约为 0 h 的 48 倍),至 30 h 有所降低.(3) Northern blot 结果显示,人胎儿前列腺间质细胞中有两种 O D C m R N A,分别为 20 kb 和 26 kb,经扫描定量结果显示:1 000μg/ L D H T 对两种 O D C m R N A  相似文献   
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