人LNα4LG4-5在毕赤酵母中的表达研究

为实现人层粘连蛋白α4链LG4-5组件(Human Laminin Alpha4Chain LG4-5Module,hLNα4LG4-5)蛋白的分泌表达,采用DNA重组技术将hLNα4LG4-5cDNA片段插入分泌型酵母表达载体pPICZαA中,构建了相应的重组表达质粒pPICZαA-LG45并在GS115毕赤酵母菌株中表达,纯化蛋白后进行细胞学实验证明,hLNα4LG4-5有明显促进肿瘤细胞粘附和扩展的作用,为深入研究LG4-5组件结构与功能奠定了基础。     

人层粘连蛋白α4链LG3组件在克隆、测序及在原核细胞中的表达

用Trizol法提取胎盘组织总RNA,通过RT-PCR方法获得人层粘连蛋白α4链LG3组件的特异扩增产物,将PCR产物克隆入PMD-18T载体中,PCR与酶切鉴定正确后进行序列测定,用测序正确的克隆片段与原核表达载体PET-28a进行体外重组,构建了LG3的原核表达载体,并在BL21（DE3）菌株中得到了表达。     

泌乳母兔体重变化及相关因素的研究

21只泌乳母兔根据其产仔数分为5个小组,进行一个月的饲养试验,试验结果表明,泌乳期间母兔的体重变化与产仔数关系各组差异不显著（P＞0．05）,与仔兔的增重呈正相关（r＝0．898）。母兔产仔后20日龄体重降到最低点,以后母兔体重开始逐渐恢复,而窝产仔数与个体初生重呈负相关（r＝-0．849）。     

人层粘连蛋白α4链LG3组件的克隆、测序及在原核细胞中的表达

用Trizol法提取胎盘组织总RNA,通过RTPCR方法获得人层粘连蛋白α4链LG3组件的特异扩增产物。将PCR产物克隆入PMD18T载体中,PCR与酶切鉴定正确后进行序列测定。用测序正确的克隆片段与原核表达载体PET28a进行体外重组,构建了LG3的原核表达载体,并在BL21(DE3)菌株中得到了表达。     

人67kD层粘连蛋白受体在毕赤酵母中的表达及活性分析

为实现人67kD层粘连蛋白受体(Human 67kD Laminin Receptor,67LR)蛋白的分泌表达,采用DNA重组技术将67LR cDNA片段插入分泌型酵母表达载体pPIC9K中,构建了相应的重组表达质粒pPIC9K-67LR并在GS115毕赤酵母菌株中表达,每升培养基经亲和层析可纯化目的蛋白12.56mg。纯化的目标蛋白能够与肺癌A549细胞竞争性结合其配体分子LN-1,具有相应的生物学活性,从而为深入研究人67LR的结构与功能奠定了基础。