苏云金芽胞杆菌cry26Aa和cry28Aa基因共表达可在芽胞外壁内侧形成伴胞晶体

苏云金芽胞杆菌幕虫亚种的伴胞晶体在预芽胞外壁内侧形成,呈现晶体芽胞粘连的现象。根据已发表的cry26Aa1和cry28Aa1基因序列设计引物,从苏云金芽胞杆菌幕虫亚种T02中扩增得到cry26Aa和cry28Aa基因,通过穿梭载体将这两个基因分别和同时转化到苏云金芽胞杆菌无晶体突变株BMB171后,透射电镜下可在芽胞外壁内侧和外侧同时观察到伴胞晶体,而单独表达时可在芽胞外壁外侧观察到伴胞晶体。结果表明,伴胞晶体在芽胞外壁内侧表达不单独依赖于启动子的时空调控,可能还受到晶体蛋白相互作用的影响。     

苏云金芽胞杆菌cry26Aa和cry28Aa基因共表达可在芽胞外壁内侧形成伴胞晶体

苏云金芽胞杆菌幕虫亚种的伴胞晶体在预芽胞外壁内侧形成,呈现晶体芽胞粘连的现象。根据已发表的cry26Aa1和cry28Aa1基因序列设计引物,从苏云金芽胞杆菌幕虫亚种T02中扩增得到cry26Aa和cry28Aa基因,通过穿梭载体将这两个基因分别和同时转化到苏云金芽胞杆菌无晶体突变株BMB171后,透射电镜下可在芽胞外壁内侧和外侧同时观察到伴胞晶体,而单独表达时可在芽胞外壁外侧观察到伴胞晶体。结果表明,伴胞晶体在芽胞外壁内侧表达不单独依赖于启动子的时空调控,可能还受到晶体蛋白相互作用的影响。     

Zwittermicin A合成基因簇中腺苷酰化功能域的预测、表达与活性验证

[目的]腺苷酰化功能域为非核糖体肽合成反应第一步底物活化的必需酶,本研究目的为验证2,3-二氨基丙酸是Zwittermicin A生物合成的直接前体物之一.[方法]本研究通过PCR的方法从苏云金芽胞杆菌菌株YBT-1520的Zwittermicin A合成基因簇中扩增得到一腺苷酰化功能域,经过双酶切和亚克隆,将此功能域克隆至超量表达载体pGEX-6p-1,将此功能域构建重组质粒pBMB1312;采用不同的IPTG浓度和温度梯度对其进行诱导,摸索了该功能域在大肠杆菌中超量表达纯化的最佳条件.[结果]得出在20℃,0.1 mmol/L IPTG,宿主菌为BL21 codon plus RP(DE3)的条件下,该功能域可以被有效纯化.同时,焦磷酸释放实验证实该功能域可以对Zwittermicin A的假想前体物2,3-二氨基丙酸进行腺苷酰化.[结论]进一步支持了2,3-二氨基丙酸是Zwittermicin A生物合成的直接前体物之一的假设.     

利用苏云金芽胞杆菌细胞表面展示系统表达禽流感病毒NP蛋白

首次利用苏云金芽胞杆菌(Bacillus thuringiensis,Bt)S-层蛋白CTC表面展示系统研究在Bt细胞表面展示禽流感病毒NP蛋白的可行性和最佳方案,为研制能常温长期保藏和运输的禽用口服疫苗奠定基础。用全长np基因或部分np基因(npp)代替S-层蛋白ctc基因的3′-端或中部,构建了4个重组质粒pSNP(含ctc-np)、pCSA-SNP(csa-ctc-np)、pCTC-NPP(ctc-npp)和pCSNPP(csa-ctc-npp)。将重组质粒分别电转化入Bt受体菌株BMB171中,获得了5个重组菌株BN、BCN、C-S、BCCN和CN。用5个重组菌株的营养细胞做玻片凝集试验,结果显示5个重组菌株均成功地在细胞表面展示了NP蛋白。用5个重组菌株的营养细胞免疫小鼠,ELISA测定血清抗体效价,结果显示5个重组菌株均具有免疫原性,其中重组菌株CN的免疫原性最高,其含融合基因csa-ctc-npp,证明该种融合基因的构建方式最佳。这为利用S-层蛋白CTC表面展示系统构建展示其它禽类病原体抗原的重组菌株以研制禽用热稳定性口服疫苗奠定了基础。     

DC 荷载alpha-GalCer 对小鼠HepS 肝癌的抑制作用

目的:研究树突状细胞(DC)荷载α-半乳糖神经酰胺(α-Gal Cer)作为自然杀伤T细胞(NKT)刺激物对原发性肝癌Heps荷瘤小鼠的抑制作用。方法:建立小鼠Hep S肝癌移植瘤模型,随机分为3组,对照组(NS对照组)、树突状细胞组(DC组)、DC荷载α-半乳糖神经酰胺组(DC+α-Gal Cer组),每组10只。分别给予尾静脉注射DC、荷载α-Gal Cer的DC4×106/m L,对照组给予同体积的NS,隔天给药1次,共3次。各组于干预后2周取眼球血,用流式细胞术(FCM)检测小鼠外周血CD4+T细胞及CD8+T细胞含量变化。取肿瘤组织,称取各瘤体重量,计算抑瘤率。免疫组化染色比较各组瘤体细胞内Bax凋亡蛋白;Westem blot法检测各组移植瘤组织内Bax的表达。结果:DC荷载α-Gal Cer组CD4+T细胞及CD8+T细胞数较DC组及对照组明显升高(P<0.05),DC组较对照组有上升趋势,但差异无统计学意义(P>0.05)。DC荷载α-Gal Cer组平均瘤体重量较对照组及DC组均显著减轻(P<0.05),DC组与对照组平均瘤重无明显变化(P>0.05)。与NS组及DC组相比,DC荷载α-Gal Cer组移植瘤内Bax阳性细胞数量及Western blot表达量明显升高,差异有统计学意义(P<0.05);DC组与NS组之间无明显差异(P>0.05)。结论:DC荷载α-Gal Cer可活化NKT细胞,激活外周血抗肿瘤免疫细胞杀伤肿瘤,抑制小鼠肝癌移植瘤的生长。     

膦酸天然产物中碳磷键生物合成机制的研究进展

膦酸天然产物是指生物体产生的结构中含有碳磷键的小分子化合物,它因为与细胞中的羧酸和磷酸化的化合物结构相似,常作为某些生命活动必需的酶抑制剂,表现出良好的生物抑制活性。已知的膦酸天然产物碳磷键合成机制可以分为四类:磷酸烯醇式丙酮酸变位酶(PepM)催化类、磷甲基转移酶(PhpK)催化类、由S-2-羟基丙基膦酸环氧化酶(HppE)催化类和一种未知的碳磷键合成机制。本文就膦酸天然产物中碳磷键生物合成机制进行综述。     

C 蛋白基因多态性对脓毒血症患者血小板功能的影响

目的:探讨蛋白C基因突变及基因型频率分布和脓毒血症患者血小板功能及血清TXB2水平的相关性。方法:纳入112例脓毒血症患者,健康人群50例为对照组。采用PCR-RFLP法测定所有受试者蛋白C基因rs 17999808C/A位点和rs1799809位点基因型及突变率。入院24小时内测定脓毒血症患者血小板计数、最大聚集率及血清TXB2水平,并对其进行SOFA评分。结果:病例组和对照组rs17999808位点和rs1799809位点间基因型分布频率无统计学差异(P0.05)。rs 17999808基因型分布C/C占81.48%、C/A占12.96%、A/A占5.55%。rs1799809位点G/G占76.54%、G/C占15.43%、C/C占8.02%。rs17999808位点和rs1799809位点突变率分贝为12.03%、15.74%。病例死亡34例,死亡率30.35%。rs17999808位点突变纯合子患者(A/A)死亡率及SOFA评分明显增高,和野生纯合子及突变杂合子患者差异有统计学意义(P0.05)。rs17999808位点C/C野生纯合子患者血小板计数和TXB2浓度明显高于C/A和A/A患者,血小板聚集率低于后两者,差异有统计学意义(P0.05)。突变纯合子A/A患者较C/C、C/A患者两两相比,差异有统计学意义(P0.05)。rs17999809位点突变和TXB2浓度有相关性(P0.05)。结论:蛋白C基因rs17999808位点突变增加了脓毒血症患者死亡风险,这可能和其改变血小板功能有关。     

早期脓毒血症患者Gelsolin 与HS-1 蛋白检测及其意义

要目的：探讨脓毒血症患者血小板骨架蛋白Gelsolin和造血系细胞特异性蛋白(HS-1)及其和凝血功能的关系。方法：纳入脓毒 血症患者30 例和对照组健康人群30 例,用双抗体夹心法测定血浆中血小板骨架蛋白,用酶联免疫法测定血清中HS-1 蛋白含 量,采用免疫荧光观察血小板Gelsolin 蛋白的表达,分析Gelsolin、HS-1、血小板计数和凝血功能(PT、APTT)之间的关系。结果：对 照组Gelsolin 主要位于血小板胞浆内,观察组包浆内外及间质内均可见。观察组血小板骨架蛋白Gelsolin、HS-1 水平明显高于对 照组,差异均存在统计学意义(P<0.05)。观察组血小板计数、PT、APTT 水平均低于对照组,差异存在统计学意义(P <0.05)。Galsolin 和血小板计数呈负相关关系,相关系数r = -0.76 (P <0.05),HS-1和血小板计数间呈负相关关系相关系数r = - 0.69 (P<0.05)。结论： 早期脓毒血症患者血小板骨架蛋白Gelsolin 和HS-1表达水平明显升高,与脓毒血症患者血小板大量破坏有关。     

米贝链霉菌DSM41911的米尔贝霉素生物合成的初步研究

对米贝链霉菌DSM41911进行初步研究,通过对16S rRNA及相关功能基因序列进行生物信息学分析,表明米贝链霉菌DSM41911与冰城链霉菌具有较高同源性。设计16种固体和液体培养基对菌株的发酵条件进行筛选,在MB4、MB6培养基中成功检测到milbemycin B5、milbemycin E、milbemycin VM44864和milbemycin B1。参考近似菌株冰城链霉菌的合成基因并结合文献推测出米尔贝霉素在米贝链霉菌DSM41911中的合成途径,为后续高产菌株的筛选提供参考。