大白兔VX2肝癌模型制作优化研究

目的:改进大白兔VX2肝癌模型制作方法并研究肝癌组织缺血再灌注后的损伤作用。方法:用特殊技术方法制备高浓度细胞悬液,分别以27号注射针头向动物肝脏左中叶注射0.3 mL,制成动物肝癌模型。待肿瘤细胞种植成功至实验标准后,阻断肝左中叶之供血和门静脉60分钟,恢复血流至各个实验时间点。检测癌组织中CAT和SOD浓度的改变和细胞凋亡情况。结果:全部动物肝脏VX2细胞悬液注射后均种植成功但每组动物中有2-3只出现肿瘤细胞外溢和种植。种植成功之肿瘤组织缺血再灌注后CAT浓度明显降低且至1天达最低水平。SOD浓度在正常肝组织和肝癌组织中均明显降低而肝癌组织在再灌注后7天气浓度仍然保持较低水平。在正常肝组织和肝癌组织中肿瘤细胞凋亡均有增加,但在后者更为显著。结论:以特殊外科方法直接向肝组织内注射VX2细胞悬液能够成功制作大白兔肝癌模型。缺血再灌注可以导致组织的细胞凋亡,但对肝癌组织的影响更大。     

结核分枝杆菌融合蛋白Ag85B-Hsp16．3、Ag85B-ESAT6和分泌蛋白Hspl6．3体外对人肝癌细胞HepG-2的作用

目的：探讨结核分枝杆菌融合蛋白Ag85B-Hspl6．3、Ag85B-ESAT6及分泌蛋白Hspl6-3对人肝癌细胞HepG-2的作用。方法：将已构建的含3种目的基因的表达载体pProEXHTa-Ag85B-Hspl6．3、pProEXHTa-Ag85B-ESAT6和pProEXHTb-Hspl6．3,分别转入宿主菌EcoliDH5α中,诱导表达后分别获得Ag85B-Hspl6．3、Ag85B-ESAT6和Hspl6．3三种蛋白,采用Ni^2＋亲和层析柱进行纯化,并用透析方法进行目的蛋白的复性。复性的蛋白按照不同浓度和作用时间分别与肝癌细胞HepG-2反应,用MTT法检测细胞生长情况。结果：三种蛋白被成功纯化并复性。MTT数据统计分析显示,终浓度101xg／ml的三种蛋白对HepG-2细胞生长没有明显作用,当三种蛋白的终浓度分别为20、40、801μg／ml时均能够抑制HepG-2细胞的生长,并且抑制作用随着蛋白终浓度的增大以及作用时间的延长而增强。不同类别的蛋白抑制作用没有明显差别。结论：结核分枝杆菌的部分分泌蛋白能够抑制肝癌细胞HepG-2的生长。     

结核分枝杆菌融合蛋白Ag85B-Hsp16.3、Ag85B-ESAT6 和分泌蛋白 Hsp16.3 体外对人肝癌细胞HepG-2 的作用*

目的:探讨结核分枝杆菌融合蛋白Ag85B-Hsp16.3、Ag85B-ESAT6及分泌蛋白Hsp16.3对人肝癌细胞HepG-2的作用。方法:将已构建的含3种目的基因的表达载体pProEXHTa-Ag85B-Hsp16.3、pProEXHTa-Ag85B-ESAT6和pProEXHTb-Hsp16.3,分别转入宿主菌E.coliDH5α中,诱导表达后分别获得Ag85B-Hsp16.3、Ag85B-ESAT6和Hsp16.3三种蛋白,采用Ni2+亲和层析柱进行纯化,并用透析方法进行目的蛋白的复性。复性的蛋白按照不同浓度和作用时间分别与肝癌细胞HepG-2反应,用MTT法检测细胞生长情况。结果:三种蛋白被成功纯化并复性。MTT数据统计分析显示,终浓度10μg/ml的三种蛋白对HepG-2细胞生长没有明显作用,当三种蛋白的终浓度分别为20、40、80μg/ml时均能够抑制HepG-2细胞的生长,并且抑制作用随着蛋白终浓度的增大以及作用时间的延长而增强。不同类别的蛋白抑制作用没有明显差别。结论:结核分枝杆菌的部分分泌蛋白能够抑制肝癌细胞HepG-2的生长。     

犬小肠缺血再灌注后NO、SOD浓度改变和血管内皮细胞凋亡相关基因表达及其意义

目的　研究犬小肠缺血再灌注后氧自由基的改变、血管内皮细胞中的Bcl 2、Bax和血管内皮细胞生长因子 (VEGF)表达改变的意义及其相关性。方法　阻断分布于小肠较小范围的小肠动脉 ,建立小肠缺血再灌注模型。检测血中NO(Nu ml)和SOD(μmol L)浓度并以免疫组织化学方法对小肠组织中的Bcl 2、Bax和VEGF的表达及它们的相关性进行观察研究。结果　小肠缺血再灌注后 ,NO和SOD的浓度 ,Bcl 2、Bax和VEGF的表达有明显的改变。小肠再灌注 0min ,NO和SOD的浓度分别是 12和 75 ,Bcl 2、Bax和VEGF的阳性细胞率分别为 85 % ,5 5 %和10 % ,再灌注 30min ,NO和SOD的浓度达最底 (11和 4 3) ,Bcl 2、Bax和VEGF分别为 6 6 %、5 4 %和 6 5 % ,而再灌注 6 0min ,NO和SOD的浓度恢复至 15和 90 ,三种基因的表达则分别为 4 4 %、75 %和 5 %。在对照组仅有少量阳性细胞。结论　小肠缺血再灌注可引起NO和SOD浓度降低、Bcl 2和VEGF表达增加 ,但随着血流恢复NO和SOD的浓度有所回升而Bcl 2和VEGF阳性细胞逐渐减少。而凋亡基因Bax的表达则逐渐增加。小肠缺血再灌注能引起氧自由基的增多、凋亡基因表达增强且有明显的相关性